CCK8操作说明与检测步骤

DOJINDO 操作说明 细胞活性检测 1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。 2. 向每孔加入 10 ml 的 CCK- 8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值的读数) 。 3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 4. 用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。 5. 如果暂时不测定 O.D 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl 溶液或者 1% w /vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。 细胞增殖 -毒性检测 1. 在96 孔板中配制 100 ml 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。 2. 向培养板加入 10 ml 不同浓度的待测物质。 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时 )。 4. 向每孔加入 10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值的读数) 。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 6. 用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。 7. 如果暂时不测定 O.D 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl 溶液或者1% w /vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 制作标准曲线 1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2. 按比例 ( 例如：1/2 比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组3-6 个复孔。 3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 O.D 值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X 轴 ) ，O.D 值为纵 坐标 (Y 轴 ) 的标准曲线。根 据 此 标准曲线可以测定出未 知 样 品 的细胞数量 (使用此 标准曲线的前提 条件是 实 验 的条件要一致 ，便 于 确 定细胞的接种数量以及 加入 CCK-8 后的培养时间)。 DOJINDO 检测步骤 CCK-8 检测步骤 1. 向各孔中加入100 μl 细胞悬液。a) 2. 在37℃下预孵育培养板。b) 3. 向各孔中加入各浓度的待测溶...