多条带分析功能(Multiplex Band Analysis) 该功能位于分析工具栏中(Analysis Tools),用于对条带、斑点及其他图形进行光密度和灰度值的定量或半定量分析。在分析化学发光 Western Blot 的图像中,可实现蛋白质表达水平的相对定量的分析功能。 注意:如果分析亮条带暗背景的图, 如 EB 胶,ECL 原始图,不用勾选 INVERT DATA, 如果分析暗条带亮背景的图, 如 SDS-PAGE, ECL 的反转图(REVERSE ), 请勾选 INVERT DATA! 一、 创建感兴趣的目标区域(Region) 根据需要分析的区域形状,在 Region 选项下选择合适的形状(圆形、矩形或自定义图形,条带图多以矩形定义),将鼠标放在目标区域附近,点击左键并拖动鼠标,将所要分析的条带框在所绘出的矩形框中。目标矩形框的大小应根据目标条带的大小适当调整。 每圈定一个目标条带时,软件会根据扫描得到的信号强度值自动计算其积分密度值,并显示在数据窗口中。每增加或删除一个目标条带,窗口里的数据会自动更新。 可以通过点击“Multi Region Copy”按钮复制定义框。定义完第一个条带后,鼠标左键点击,然后依次点击需要定义的条带中央,这样可以定义第二个、第三个……条带。 如果条带定义框大小不适合,或者位置不合适,可以用鼠标左键单击该定义框,该定义框四个角和边线中点出现蓝色方点,用鼠标上下左右拖动蓝色方点可调整定义框的大小和位置。 二、 背景扣除(Bkgrnd) 任何条带所处位置均有背景本底,必须扣除其背景本底,才能得到该条带真正的信号强度值,用于蛋白质表达水平的相对定量。 背景扣除有三种算法: 1、 Regional Background 对所有条带均采用一个背景区域进行背景扣除计算。 如果 Western 膜的背景比较均匀的照片,可以采用该背景扣除算法。 软件操作:在Analysis Tools 工具栏 在选 择Multiplex Band Analysis 中的Bkgrnd 一栏,选中,并使用定义框选定一块背景区域即可。软件自动进行背景扣除的计算。 2、 Multi-Regional Background 对不同条带关联不同背景区域进行背景扣除计算。 如果 Western 膜的背景不是均匀的照片,需要选择更有代表性的背景区域分别与相应的条带进行关联来扣除其背景值,一般选用目的条带附近,与条带所在区背景相同或相近的区域作为该条带的背景区。这样不同的条带需要选择多个背景区来进行背景扣除计算。 软件操作:在 Analysis Tools 工具栏在选择 Multiplex Band Analysis...