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常见分子生物学试验

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陈阳松溶液稀释与配比C1V1=C2V2:万能稀释公式,一般母液和终浓度比不为 X:1 用这个公式计算。X/1:当母液与终浓度比为 X:1 时用这个快速方法,此时方法为把母液分为 1,剩下的用总比例减掉,如:X2(1:1), X6(1:5),X10(1:9)。百分数和 mol 数转以 1%盐浓度进行转换换设是 100 克的此溶液,则有99 克的水和 1 克的盐(NaCl),盐的物质的量为 1/58.5=0.017mol,水体积为 99mL=0.099L,所以物质的量浓度为0.017/0.099=0.17mol/L,即摩尔浓度为 0.17mol/L1%=1g/100g(1/58.5)/0.0991. 各成分作用CTAB 法提取 DNACTAB:溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离;Tris-HCl (pH8.0):提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;EDTA:螯合 Mg2+或 Mn2+离子,抑制 DNase 活性;NaCl:提供一个高盐环境,使 DNA 充分溶解,在于液相中;β-巯基乙醇:抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除;PVP(聚乙烯吡咯烷酮):酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少 DNA 中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。酚:使蛋白质变性,同时抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与 DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而 DNA 溶于水相。氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层,去除核酸溶液中的迹量酚。异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含 DNA 的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。2. 操作步骤陈阳松打样新鲜叶片,转速 220r/min,1min,打样时管身全部冻着,而且放在打样机的时候保证盒子里面得有液氮,这样样品才能充分打碎,写字的朝向一致,以便认字提取1)称取 0.1g(约 3-4 片)新鲜叶片,液氮中研磨成粉末,加入 800ulCTAB 缓冲液轻轻摇匀,65°C 水浴(烘箱)保温 30min 左右;备注用 2ml 管提取时,加完 CTAB 在本子上记录好每个样品的名字,防止后面漏管和裂管时查找被抹掉的号,这样可以防止在侧壁写管的麻烦;在等待的过程时,即可拿出 1.5ml 离心管加入异戊醇做好准备;写字的朝向一致,以便认字2)冷却(放冰箱)至室温后,加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1)盖上瓶盖,温和摇动,使成乳状液。备注一定要冷却,不然的话,热涨后盖子盖不紧,此处必须摇匀,不然会因...

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