常见分子生物学试验

陈阳松溶液稀释与配比C1V1=C2V2：万能稀释公式，一般母液和终浓度比不为 X:1 用这个公式计算。X/1：当母液与终浓度比为 X：1 时用这个快速方法，此时方法为把母液分为 1，剩下的用总比例减掉，如：X2（1:1）， X6（1:5），X10（1:9）。百分数和 mol 数转以 1%盐浓度进行转换换设是 100 克的此溶液，则有99 克的水和 1 克的盐（NaCl），盐的物质的量为 1/58.5=0.017mol，水体积为 99mL=0.099L，所以物质的量浓度为0.017/0.099=0.17mol/L，即摩尔浓度为 0.17mol/L1%=1g/100g(1/58.5)/0.0991. 各成分作用CTAB 法提取 DNACTAB：溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；Tris-HCl (pH8.0)：提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA：螯合 Mg2+或 Mn2+离子，抑制 DNase 活性；NaCl：提供一个高盐环境，使 DNA 充分溶解，在于液相中；β-巯基乙醇：抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除；PVP(聚乙烯吡咯烷酮)：酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少 DNA 中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。酚：使蛋白质变性，同时抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与 DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而 DNA 溶于水相。氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层，去除核酸溶液中的迹量酚。异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA 的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。2. 操作步骤陈阳松打样新鲜叶片，转速 220r/min，1min，打样时管身全部冻着，而且放在打样机的时候保证盒子里面得有液氮，这样样品才能充分打碎，写字的朝向一致，以便认字提取1)称取 0.1g(约 3-4 片)新鲜叶片，液氮中研磨成粉末，加入 800ulCTAB 缓冲液轻轻摇匀，65°C 水浴（烘箱）保温 30min 左右；备注用 2ml 管提取时，加完 CTAB 在本子上记录好每个样品的名字，防止后面漏管和裂管时查找被抹掉的号，这样可以防止在侧壁写管的麻烦；在等待的过程时，即可拿出 1.5ml 离心管加入异戊醇做好准备；写字的朝向一致，以便认字2)冷却（放冰箱）至室温后，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1）盖上瓶盖，温和摇动，使成乳状液。备注一定要冷却，不然的话，热涨后盖子盖不紧，此处必须摇匀，不然会因...