免疫组化操作步骤

免疫组化操作步骤 第一节 免疫组化操作步骤及抗原修复（供参考） 第二节 免疫组化抗原热修复的技术要点（供参考） （一）、仪器设备 1. 18cm 不锈钢高压锅或电炉或用微波炉. 2. 水浴锅 （二）、试 剂 1. PBS 缓冲液（pH7.2―7.4） 2．0.01mol/L 柠檬酸钠缓冲液（CB,pH6.0,1000ml） 3. 3%甲醇―H2O2 溶液：用30%H2O2 和80%甲醇溶液配制 4. 风裱剂：a. 甘油和0.5mmol/L 碳酸盐缓冲液（pH9.0–9.5）等量混合 b 油和TBS(PBS)配制 5．TBS/PBS pH9.0–9.5,适用于荧光纤维镜标本;pH7.0-7.4 适合光学纤维标本 （三）、操作流程 1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60 分钟或60℃恒温箱中烘烤 20 分钟。 a 组织芯片置于二甲苯中浸泡 10 分钟,更换二甲苯后在浸泡 10 分钟 b 无水乙醇中浸泡五分钟 c 95%乙醇中浸泡五分钟 d 75%乙醇中浸泡五分钟 2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片： 抗 原 修 复（免疫组化石蜡切片） 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片需要抗原修复 福尔马林固定的组织有可能破坏了原来组织的抗原结构，蛋白多肽发生交联，导致部分抗原表位封闭，结合位点减少，所以需要抗原修复，以暴露原来的抗原表位，达到充分显露抗原，以不出现明显脱片现象为佳。 抗原修复的几种常用方法（供参考） 1. 微波炉加热：在微波炉里加热 0.01 枸橼酸钠缓冲液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔 5-10 分钟，反复 1-2 次。根据玻片情况可参考采用微波加热“3-5-3 法”3 分钟温火沸腾后静止 5 分钟，再温火沸腾 3 分钟即可。 适用的抗原：来源于人、大鼠、小鼠的组织标本；来源于其他动物种属的组织标本： 2. 沸热修复： 电炉或水浴锅加热 0.01M 枸橼酸钠缓冲液（pH6.0）至 95℃左右，放入组织芯片加热 10-15 分钟。 3. 高压热修复：在沸水中加入 EDTA(pH8.0)或0.01m 枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）.盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10 分钟后除去热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。（骨及软骨组织的标本最好选择较温和的微波加热修复） 4. 酶消化方法： 常用 0.1%胰蛋白酶和 0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热 37℃，消化时间约为 5-30 分钟。适用于被固定遮蔽的抗原： ...