免疫组化的图象分析

免疫组化的图象分析 我这里说的免疫组化图片，是这样的一类图片：染上的颜色是黄色，如果染得浓，就呈现棕黄色。（制作样品的过程可别问我。我不知道） 要比较 不同切片的光密度值来确定它们之间的蛋白表达的差异，首先要注意的就是这些切片样品要用尽可能完全一致的方法来处理。最近看到一个新技术挺不错，就是把各个样品定位后，各切出一个小细条，整整齐齐排成一个阵列，包埋在蜡块中，切成一片切片，然后进行免疫组化反应及染色处理。这样在一个载玻片上就有了数百个小切片，不仅它的的切片染色条件一致，还节省了抗体试剂。 切片当然首先得拍成照片才能进行分析。拍照也是一个重要环节，在显微镜下拍摄免疫组化照片需要注意以下几个要点： 1. 所有照片必须在完全同样的显微镜条件下拍摄，在更换样品时，除了调整焦距和 视 野 外 ，显微镜上的其 他 部 件都 不能动 ！ 所有的样品必须一次 拍摄完全。特 别是在拍 摄过程中，不要一会 用高 倍镜，一会 用低 倍 镜，来回 切换物 镜。当然，在使 用高 倍 镜时对 焦及寻 找 视 野 会 稍 麻 烦 一点，但 也没办 法。保 持 各张 切片的拍摄条件一致更 重要。 2.数码 相 机 必须设 置 为 手 动 曝 光，并 且 保 持 每 张 照片用同样的曝 光条件，同样的曝 光时间，同样的光圈 。特 别要注意的是，一定要将 数码 相 机 的自 动 白平 衡 功 能给 关 掉 ！ ！ ！ 3. 免疫组化切片一般 染色不太 深 ，因 此 拍摄出的照片颜色较浅 ，就让 它浅 。拍摄出的照片中空 白部位应尽可能呈现纯 白色。测 量 其 灰 度应在 230-240 之间。如果 呈现淡 蓝 色，一般 是相 机 自 动 白平 衡在起 作用。另 外 一个因 素 是显微镜灯 光电 压 不正 确。要使 灯 光本 身 的色温 正 确。既 不偏 黄，也不偏蓝 。下面 两 张 照片中左 边 一张 是合 适 的曝 光，右 边 那 张 不好 。 打 开 要分析的图片后首先要进行光密度校 正 。 点开intensity calibration 窗口后，选std option density，并点option 按纽，在弹出的窗口里点insident 旁边的image 按纽。弹出第三个窗口后，将鼠标移到图片的空白处点一下，就可 以看到 current value 的值会显示出点击部位的灰度值。白色的背景能达到 250 左右，而拍得较暗的照片或者背景偏蓝的照片则只有 200 甚至更低。...