单 抗 制 备 流 程 1975 年 ，Kohler 和 Milstein 发 现 将 小 鼠 骨 髓 瘤 细 胞 和 绵 羊 红 细 胞 免 疫 的 小鼠 脾 细 胞 进 行 融 合 ， 形 成 的 杂 交 细 胞 既 可 产 生 抗 体 ， 又 可 无 限 增 殖 ， 从 而 创 立 了单 克 隆 抗 体 杂 交 瘤 技 术 。这 一 技 术 上 的 突 破 不 仅 为 医 学 与 生 物 学 基 础 研 究 开 创 了新 纪 元 ， 也 为 临 床 疾 病 的 诊 、 防 、 治 提 供 了 新 的 工 具 。 制 备 单 克 隆 抗 体 包 括 动 物 免 疫 、 细 胞 融 合 、 选 择 杂 交 瘤 、 检 测 抗 体 、 杂 交 瘤细 胞 的 克 隆 化 、 冻 存 以 及 单 克 隆 抗 体 的 大 量 生 产 ， 要 经 过 几 个 月 的 一 系 列 实 验 步骤 ， 下 面 按 照 制 备 单 克 隆 抗 体 的 流 程 顺 序 ， 逐 一 介 绍 其 实 验 方 法 。 一 、 细 胞 融 合 前 准 备 (一 ) 免 疫 方 案 选 择 合 适的 免 疫 方 案 对于细 胞 融 合 杂 交 的 成 功， 获得高质量 的 McAb 至关重要 。 一 般要 在融 合 前 两个 月 左右确立 免 疫 方 案 开 始初次免 疫 ， 免 疫 方 案 应根据抗原的 特性不 同而 定。 1.颗粒性抗 原免 疫 性较强， 不 加佐剂就可 获得很好的 免 疫 效果。 下 面 以 细 胞性抗 原为 例的 免 疫 方 案 : 初次免 疫 1×10７／0.5ml ip (腹腔内注射) ↓ 2～3 周后 第二次免 疫 1×10７／0.5ml ip ↓ 3 周后 加强免 疫 (融 合 前 三天) 1×10７／0.5ml ip 或 iv(静脉内注射) ↓ 取脾 融 合 2.可 溶性抗 原免 疫 原性弱， 一 般要 加佐剂， 常用佐剂：福氏完全佐剂， 福氏不 完全佐剂。 要 求抗 原和 佐剂等体 积混合 在一 起， 研 磨成 油包 水的 乳糜状， 放一滴在水面 上 不 易马上 扩散呈小 滴状表明已达到油包 水的 状态。 商品化 福氏完全佐剂在使用前 须振摇， 使沉淀的 分枝杆菌充分混匀。 初次免 疫 Ag 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下 多点注射 │ (一般0.8～1ml 0.2ml／点) ↓3 周后 第二次免疫 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip │ (...
