精品文档---下载后可任意编辑HPV16 E7c 与人 β 防备素 2 融合基因表达质粒的构建、表达与免疫功能实验讨论的开题报告讨论背景与意义:人类乳头瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈癌和其他妇科癌症的主要原因之一。 感染 HPV16 和 18 型病毒株增加了罹患宫颈癌的风险，并且这两种病毒占所有宫颈癌的 70％以上。因此，进展 HPV16 和 18 预防和治疗新策略至关重要。人 β 防备素 2(DEFB2)是一种天然免疫反应分子，具有广谱抗病毒和抗肿瘤活性。因此，将 HPV16 E7c 与 DEFB2 基因融合可能会提高病毒病和肿瘤的免疫保护作用。因此，本讨论旨在构建 HPV16 E7c 和 DEFB2 基因的融合质粒，并讨论其免疫功能，以寻求一种新的 HPV16 相关疾病的预防和治疗策略。讨论方法:1.利用 PCR 扩增 HPV16 E7c 和 DEFB2 基因序列，并进行 DNA 连接。2.将 E7c-DEFB2 融合基因克隆到表达载体 pUC57 中。3.转化大肠杆菌 DH5α 菌株，并筛选获得重组融合质粒。4.提取重组质粒进行限制性酶切和测序验证。5.将重组质粒转染入 HEK293T 细胞，用 Western blot 检测蛋白表达。6.合成 E7c、DEFB2 和 E7c-DEFB2 的多肽，用于实验分析多肽的免疫反应。预期结果和意义:估计成功构建 HPV16 E7c 和 DEFB2 基因的融合质粒，并在HEK293T 细胞中成功表达融合蛋白。使用合成的多肽对小鼠进行免疫，并通过检测小鼠的免疫反应来评价 E7c-DEFB2 多肽的免疫效果。假如本讨论成功，本讨论将提供一种新的 HPV16 相关疾病预防和治疗策略。
