精品文档---下载后可任意编辑RNA 干扰 C TAⅡ控制大鼠肝移植急性排斥反应的实验讨论的开题报告一、讨论背景和意义肝移植是目前治疗肝功能衰竭和肝癌的有效措施之一，但是肝移植后急性排异反应是一种常见并发症，严重影响移植肝的存活率和患者的生存质量。因此，讨论肝移植后的免疫反应机制，探寻有效的干预手段，对于提高肝移植的成功率和患者的生存质量都具有重要意义。CⅡTA（class II transactivator）是一种介导 MHC II 类分子的表达的转录因子。在免疫反应中，CⅡTA 是调控 MHC II 类分子表达的重要分子之一，亦参加了调节细胞因子的表达等多种免疫反应过程。近期讨论显示，在小鼠心移植模型中，RNA 干扰CⅡTA 的表达可以减轻移植后的排异反应，但是在肝移植模型中还未进行讨论。本实验旨在探究 RNA 干扰 CⅡTA 在肝移植后对急性排异反应的影响，为寻找肝移植后的干预手段提供理论依据和实验数据支持。二、讨论内容和方法1.讨论内容（1）探讨 CⅡTA 基因的表达情况 利用实时荧光定量 PCR 检测 CⅡTA 基因在健康大鼠肝脏中的表达水平。（2）建立大鼠肝移植模型 采纳受体动物自体门静脉血管吻合肝脏供体颈总动脉、门静脉的方法建立大鼠肝移植模型。（3）RNA 干扰 CⅡTA 进行肝移植 将针对 CⅡTA 基因的 shRNA 注入到供体肝组织内，使供体肝脏细胞中 CⅡTA 基因表达水平下降，然后将供体肝脏移植到受体动物体内。（4）观察移植后肝脏组织病理变化 采纳组织病理学方法观察移植后受体动物肝脏组织病理变化情况。（5）检测移植后受体动物免疫反应水平 利用 ELISA 检测受体动物 IL-2、IFN-γ 等细胞因子的表达水平，及 T 淋巴细胞亚群的变化情况。2.讨论方法（1）实验动物精品文档---下载后可任意编辑六周龄 Wistar 大鼠，雄性和雌性均可，体重 200-230g。养殖条件：通风、恒温、恒湿，光照 12 小时/日。（2）试验组 实验组：shRNA-CⅡTA。 阴性对比组：shRNA-NC。（3）RNA 干扰 CⅡTA 将 shRNA-CⅡTA 注入到供体肝脏组织中，使供体肝脏细胞中 CⅡTA 基因表达水平下降。注入原料为 pGPU6/GFP/Neo 质粒，转染效率采纳流式细胞仪检测。注射方法为静脉注射。（4）免疫反应检测 分别在移植后第 1、3、7、14 天从受体肝脏组织中取出 T 淋巴细胞，采纳流式细胞仪检测 T 淋巴细胞亚群变化情况。同时采纳 ELISA 检测受体动物 IL-2、IFN-γ 等细胞因子的表达水平。（5）数据统计和分...
