S0P_18-37 新型冠状病毒 2019-nCoV 基因(之江)扩增检测操作规程1.名称新型冠状病毒(2019-nCoV)RNA2.目的规范新型冠状病毒(2019-nCoV)RNA 荧光定性 PCR 项目检测试验，确保检测结果的准确性和重复性。3.方法TaqMan 探针实时荧光定性。4.检测原理本试剂盒采用 RNA 逆转录反应以及聚合福链式反应(PCR)结合Taqman 技术，根据病毒的核酸序列设计特异性的引物用于扩增对应的核酸片段，同时，高度特异性的 TaqMan 探针可与对应的核酸片段进行结合，并在 Taq 酶夕、切酶活性作用下发生水解，产生荧光信号,根据荧光信号与扩增循环数之间的关系可得到实时扩增曲线。本试剂盒中以 2019-nCoV 的 0RFl.ab 基因，E 基因和 N基因为检测对象，从而实现对 2019-nCoV 核酸的检测。5.样品咽拭子、痰液等6.试剂上海之江生物科技股份有限公司序号组分包装规格 50 人份/盒12019 新型冠状病毒核酸荧光 PCR 检测混合液988ul.Xl.2RT-PCR 酶52ul.Xl.32019 新型冠状病毒内标60U1.X1.42019 新型冠状病毒阴性对照品400U1.X1.52019 新型冠状病毒阳性对照品400U1.X1.注：不同批号的组分不可以互换使用。酶在使用前应低速离心数秒，以收集管壁或管盖残留成分。其它组分使用前应在室温下融解，旋泯震荡数秒，充分混匀，低速离心数秒后使用。7.仪器苏州雅睿生物技术有限公司 MA-6000 实时荧光定量 PCR仪。8.操作步骤8.1PCR 试剂准备（I 区）8.1.1 从试剂盒中取出 PCR 检测混合液、RT-PCR 酶、内标，室温融化后振荡混匀，8,000rpm 离心数秒后使用。8.1.2 取 N 个（N 二待测样本个数+阴性对照品+阳性对照品）PCR 反应管将各组分充分混合后进行短时离心，以使管壁上的液体全部离心至管底，之后将 20u1.扩增体系分装到 PCR 管中。将装有PCR 反应液的 PCR 管置 I 区〜II 区传递窗。NC 单人份扩增体系配制如下表:PCR 检测混合液RT-PCR 酶扩增体系19ul.l.ul.20u1.8.1.3 试剂准备区清洁:每次完成配液操作后，用 75%的酒精清洁实验室台面用 2000mg/L 含氯消毒剂清洁实验室地面，打开实验室紫外线，人员退出实验室。8.2 核酸模板提取（H 区）核酸提取:取 200u1.液态样本进行核酸提取。采用西安天隆科技有限公司提供的核酸提取或纯化试剂盒；具体操作步骤请按照试剂盒说明书指引进行。8.3 加样（II 区）在配制好体系的 PCR 反应管中分别加入处理后的阴性对照品、待测标本核酸、阳性对照品各 5u1.,盖紧管盖，8,000rpm 离...
