电脑桌面
添加小米粒文库到电脑桌面
安装后可以在桌面快捷访问

实时荧光基因相对表达数据处理△△CT

实时荧光基因相对表达数据处理△△CT_第1页
1/7
实时荧光基因相对表达数据处理△△CT_第2页
2/7
实时荧光基因相对表达数据处理△△CT_第3页
3/7
实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)数据处理 相对定量△CT 和 2-△△CT 方法 一、实时荧光原理及其中的概念 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)作为分子生物学实验中强大快速的一种检测手段,已经被广泛应用于临床和普通实验室。废话不多说,简单介绍一下其原理,和两个基本概念 Ct(Cycle threshold)和扩增效率,然后详细解释一下相对基因定量的方法。 实时定量PCR 技术:利用荧光信号的变化实时检测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过 Ct 值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。qPCR 中常用的荧光染料为SYBR Green I ,加入过量SYBR 荧光染料,SYBR 荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号,因此在 PCR 每个循环的延伸(双链 图 2)过程中检测荧光信号,可以绘制原始的扩增曲线。如下图 1: n 扩增曲线可以分为:图 3 1. 基线期 :-荧光信号在最初的数个循环里变化不大,接近一条直线,称为基Rn 荧光信号量,n 为循环数 图 1:PCR 扩增曲线 图 2 :双链发射荧光 线。 2. 对数期 :-继基线之后,扩增进入到指数增长期,像细菌的繁殖曲线 3. 平台期 :-随着扩增的循环增加,引物,dNTP 的消耗殆尽,不会再有新的DNA链产生了,就进入到平台期了 实时荧光PCR 中重要的概念:CT 、扩增效率 CT值(Cycle threshold value):实时荧光PCR过程中,扩增产物的荧光信号达到设定阈值时所经过的扩增循环数。起 始 模 板 DNA量 越 多 , 荧 光 达 到 域 值 的 循 环 数越 少 , 即 Ct值 越 小 。 Log模 板 起 始 浓 度 与 Ct值 呈 线 性 关 系 。 扩增效率 E(efficiency):理想的PCR 反应在指数期应该是 Rn=R0 * 2n(Rn,n 次循环产物量。R0,初始模板量。n,循环次数) 因为每扩增一次 PCR 产物就会变为上次的2 倍。但是在实际 PCR 扩增中E 基本在 0.65-0.9。因此每个 PCR 反应的效率不一定都相同。因此,扩增公式可以写成 :Rn= R0*(1+E)n 二、2-△△CT 数据处理的方法 基因定量包括绝对定量和相对定量。绝对定量就是标准曲线法,这里不详细图 3 扩增曲线的分期 介绍,可以问度娘。绝对定量法比较费时费力,除了特殊情况,相对定量的方法也可以达到实验目的。在相对基因定量方法中,目前被广泛采用的就是2-△△CT法。用此...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在违规,或者侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“违规举报”。

碎片内容

实时荧光基因相对表达数据处理△△CT

确认删除?
VIP
微信客服
  • 扫码咨询
会员Q群
  • 会员专属群点击这里加入QQ群
客服邮箱
回到顶部