cDNA全长测序一、RNA提取（一）实验用品Trizol、氯仿、异丙醇、乙醇（75%，现用现配）、RNase—free水、大量酒精、冷冻离心机、1ml、200微升、10微升枪及枪头、EP管、研钵、剪刀、药匙、卫生纸、冰盒、口罩、手套、工作服、棉手套、计时器（二）实验步骤1
选活力良好的贻贝，迅速剪入研钵中（尽量剪碎），加入液氮，迅速研磨成粉末状（研钵中可以事先加入液氮预冷）
粉末状后迅速加入1mlTrizol，研磨均匀呈液体状，0℃放置5min（蛋白质彻底裂解）
向1mlTrizol中加入0
2ml氯仿，用力振荡15s（涡旋），室温放置3min，4℃12000g离心10min
将上层水相（约500微升）移至一干净的EP管中，加入等体积（约600微升）异丙醇，混匀，轻轻颠倒几下，-20℃放置10min
4℃12000g离心10min
小心弃上清（直接倒，然后反扣到干净的卫生纸上），加入1ml75%乙醇，并混合样品（要使样品悬浮起来），4℃12000g离心5min
重复步骤5，最后空转一下，用枪尽量吸去剩余的酒精（在超净工作台上操作）
通风厨（工作台）中干燥，闻不到酒精味即可（2-10min），加30-50微升（50微升）DEPC水，室温20min，使RNA彻底溶解
1%琼脂糖凝胶检测（胶槽，胶板用酒精擦干净，换新鲜电泳液），140V电泳10min检测
（99V，33min）
紫外检测，RNA溶液立即-70℃冰箱保存
（动作要迅速，冰上操作，试验前准备要充分）以下｛｝中的可以不操作｛组织样品中总RNA中DNA的消除：（1）无RNA酶活性的DNase1（5u/uL）2uLRNaseInhibitor（40u/uL）0
5uL10×DNasebuffer5uL总RNA20-50uLDEPC水补充到50uL（2）37℃反应20-30min（3）加入
