综合性实验 实验一、噬菌体的分离和纯化及效价测定 病毒是一类个体极小的超显微生物,必须借助电子显微镜才能观察到
病毒没有细胞结构,大多数病毒是蛋白质与核酸组成的大分子,每种病毒的核酸或是RNA 或是DNA
它们是专性寄生物,不能独立进行代谢活动与繁殖,只能在特异的宿主细胞内进行复制
根据宿主的不同,可将病毒分为动物病毒(包括昆虫病毒)、植物病毒与细菌病毒——噬菌体等
由于病毒是专性寄生物,因此还不能用人工培养基进行培养,对病毒的培养与测定主要依靠实验性感染,例如细菌病毒(噬菌体)需要对特异性细菌进行感染:植物病毒进行实验性植物感染,而动物病毒常用鸡胚培养和组织培养来代替动物的实验性感染:昆虫病毒则用昆虫感染或组织培养
一、实验目的 1、学习噬菌体分离、纯化的基本原理和方法
2、观察噬菌斑,学习噬菌体效价测定的基本方法
二、基本原理 因为噬菌体是专性寄生物,某种噬菌体往往只能感染一种或与它相近的某种细菌,其分布一般取决于宿主细菌的分布,所以自然界中凡有细菌的地方,均可发现其特异的噬菌体的存在
例如粪便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌,在其中能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体:乳牛场有较多的乳酸杆菌,容易分离到乳酸杆菌噬菌体等
虽然近年的研究表明,自由噬菌体颗粒可以在环境中短期独立存活,对自然条件有一定的耐受能力,又受到自然流动的散布,不一定总是和其宿主细菌同时存在,但没有宿主细菌的地方,其特异噬菌体的数量比较少
大多数烈性噬菌体DNA (或RNA)侵入细菌细胞后迅速进行复制、转录和系列基因的表达并装配成噬菌体颗粒,通过裂解宿主细胞或通过"挤出"(ex clu de)宿主细胞(宿主细胞不被杀死,如 M I3 噬菌体)而释放出来,可使混浊的菌悬液变为澄清或比较清,此现象可指示有噬菌体存在
也可利用这一特性,在样品中加入敏感菌株与液体培养基,进行培养,使噬菌体增殖、释放,从而分离到