RNA 提 取 一 般 步 骤 总 结 RNA 提 取 原 理 ： 通 过 变 性 剂 破 碎 细 胞 或 者 组 织 ， 然 后 经 过 氯 仿 等 有 机 溶 剂 抽 提 RNA， 再 经 过 沉 淀 ， 洗 涤 ， 晾干 ， 最 后 溶 解 。 但 是 由 于 RNA 酶 无 处 不 在 ， 随 时 可 能 将 RNA 降 解 ， 所 以 实 验 中 有 很 多 地 方 需 要 注 意 ， 稍 有 疏忽 就 会 前 功 尽 弃 。 RNA 提 取 的 一 般 步 骤 所 有 RNA 的 提 取 过 程 中 都 有 五 个 关 键 点 ， 即 ： 样 品 细 胞 或 组 织 的 有 效 破 碎 ； 有 效 地 使 核 蛋 白 复 合 体 变 性 ；对 内 源 RNA 酶 的 有 效 抑 制 ； 有 效 地 将 RNA 从 DNA 和 蛋 白 混 合 物 中 分 离 ； 对 于 多 糖 含 量 高 的 样 品 还 牵 涉 到 多 糖杂 质 的 有 效 除 去 。 但 其 中 最 关 键 的 是 抑 制 Ｒ Ｎ Ａ酶 活性 。 RNA 的 提 取 目前 阶段主要 可 采用两种途径:提 取 总 核酸， 再 用氯 化锂将 RNA 沉 淀 出来； 直接在 酸性 条件下抽 提 ， 酸性 下DNA 与蛋 白 质 进入有 机 相而RNA 留在 水相。第一 种提 取 方 法将 导致小分 子量 RNA 的 丢失， 目前 该方 法的 使 用频率已很 低。 实 验 步 骤 ： 破 碎 组 织 →分 离 RNA→沉 淀 RNA→洗 涤 RNA→融解 RNA→保存RNA。 1、 破 碎 组 织 和 灭活RNA 酶 可 以 同步 进行， 可 以 用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋 白 酶 K 等 破 碎 组 织 ，加入β-ME 可 以 抑 制 RNA 酶 活性 。 2、 分 离RNA 一 般 用酚、氯 仿 等 有 机 溶 剂 ， 加入少量 异戊醇， 经 过 此步 ， 离 心， RNA 一 般 分 布于 上层， 与蛋白 层分 开。 3、 沉 淀 RNA 一 般 用乙醇、3M NaAc（pH-5.2）或 异丙醇。 4、 洗 涤 RNA 使 用70％乙醇洗 涤 ， 有 时 ， 为避免RNA 被洗 掉， 此步 可 以 省掉， 洗 涤 之后 可 以 晾 干 或 者 烤干 乙醇， 但 是 不 能 过 于 干 燥， 否则不 易溶 解 。 5、 融解 RNA 一 般 使 用TE。 6、 保存RNA 应该尽 量 低温...
