植物体内氧自由基含量的测定 一、目的 生物体内的一部分氧分子，在参与酶促或非酶促反应时，若只接受一个电子，会转变为超氧阴离子自由基（O2－）。O2－ 既能与体内的蛋白质和核酸等活性物质直接作用，又能衍生为H2O2 羟自由基（·OH）、单线态氧（1O2）等。·OH 可以引发不饱和脂肪酸脂质（RH）过氧化反应，产生一系列自由基，如：脂质自由基（·R）、脂氧自由基（RO·）、脂过氧自由基（ROO·）和脂过氧化物（ROOH），自由基积累过多时会对细胞膜及许多生物大分子产生破坏作用。本实验主要掌握植物体内氧自由基的测定原理及方法。 二、原理 在生物体中，氧作为电子传递的受体，得到单电子时，生成超氧阴离子自由基（O2－）。 利用羟胺氧化的方法可以测定生物系统中 O2－含量。O2－与羟胺反应生成 NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成粉红色的偶氮染料（对－苯磺酸－偶氮－α－萘胺）。取生成物在530nm 波长处测定吸光度（A）值，根据A530值可以算出样品中 O2－含量。反应式如下： NH2OH + 2O2－ ＋ H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O 三、材料、仪器设备及试剂 1. 材料：花生、绿豆、大豆黄化幼苗 的下胚 轴 及其 他 植物叶 片 。 2. 仪器设备：高 速 冷 冻 离心 机 ； 分光光度计 ； 恒 温 水 浴 锅 ； 研 钵 ； 试管 ； 移 液 管 ； 试管架 ； 移 液 管 架 ； 洗 耳 球 等。 3. 试剂配 制 ： 50 mmol·L－1磷 酸缓 冲 液 （pH7.8） 1 mmol·L－1盐 酸羟胺 17 mmol·L－1对氨基苯磺酸（以冰 醋 酸 ：水 = 3 ：1 配 制 ） 7 mmol·L－1 α－萘胺（以冰 醋 酸 ：水 = 3 ：1 配 制 ） 50nmol·ml－1NaNO2母 液 四 、实验步 骤 1. 提 取液 制 备 称 取1g 植物叶 片 放 入 冰 浴 的研 钵 中，加 入50mmol·L－1磷 酸缓 冲 液 （pH7.8）5ml, 研磨 成匀 浆 ，在1000r/min，4℃ 下离心 10min，取上 清 液 再 以 15000r/min，4℃ 下离心 20min，第 二次 上 清 液 即 为样品提 取液 。 2. 亚 硝 酸根标 准 曲 线的制 作 2.1 系列浓 度NaNO2溶 液 的配 制 取50nmol·ml－1NaNO2母 液 ，分别 稀 释 成 0、10、20、30、40 和50、nmol·ml－1的标 准稀 释 液 。 2.2 取7 支 试管 ，编 0～ 6 号 ，分别 加 10、15、20、30、40、50、nmol·ml－1Na...
