第六章 沉淀反应 沉淀反应是指可溶性抗原与对应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象。 第一节 沉淀反应的特点 沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素等可溶性物质。 沉淀反应分两个阶段, 第一阶段为抗原抗体发生特异性结合,几秒到几十秒即可完毕,出现可溶性小的复合物,肉眼不可见; 第二阶段为形成可见的免疫复合物,约需几十分钟到数小时才能完毕,如沉淀线、沉淀环。 第二节 液体内沉淀试验 一、絮状沉淀试验 抗原抗体溶液在电解质的存在下结合,形成絮状沉淀物,这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响,因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的措施,常见类型有: (一)抗原稀释法 抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。 (二)抗体稀释法 抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。 (三)方阵滴定法 方阵滴定法即棋盘滴定法。 二、免疫浊度测定 属于液体内沉淀反应,其特点是将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应,可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。 (一)免疫比浊测定的影响原因 1。抗原抗体的比例 是浊度形成的关键原因。 当抗原过量时,形成的 IC 分子小,并且会发生再解离,使浊度反而下降,光散射亦减少,这就是高剂量钩状效应。当抗体过量时,IC 的形成伴随抗原递增而增长,至抗原、抗体最适比例处达最高峰,这就是经典的海德堡曲线理论。 在反应体系中保持抗体合适过量,如形成抗原过量则导致测定的精确性减少。 2。抗体的质量 对免疫比浊测定法的抗体规定 (1)特异性强:抗血清最关键的规定是单价特异性,即该抗体只针对某一种抗原,与其他无关抗原不发生交叉反应,特异性抗体和对应抗原结合后形成的浊度代表真实的试验成果。 (2)效价高:低效价(<1:20)抗体会增长非特异性浊度(伪浊度)的产生. (3)亲和力强:则抗体的活性高,不仅可以加紧抗原抗体反应的速度,并且形成的 IC 较牢固,不易发生解离。在速率比浊法中尤为重要。 (4)R 型和 H 型抗体 :根据抗血清来源的动物种类不一样,分为 R 型抗体和 H 型抗体。 R 型抗体 是指以家兔为代表的小型动物被注射抗原免疫后制备的抗血清。此类抗血清的特点是亲和力较强 , 抗原抗体结合后不易发生解离 。 H 型抗体 是指以马为代表的大型动物注射抗原后制备的抗血清,此类抗血清的亲和力弱,抗原抗体结合后极易解离。 3。抗原抗体反应的溶液 反应液最适 pH ...