实验 1：抗 ANA 自身抗体的检测（欧蒙斑点法）一、实验目的及原理抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是一组针对细胞核成分的自身抗体。ANA 阳性提示患有自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病、干燥综合症、全身性硬皮病、原发性胆汁性肝硬化等。根据细胞内各分子的理化特性和分布部位，ANA 可分为抗 DNA 抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体和抗其他细胞成分抗体。在本实验中，抗核抗体谱（IgG）检测试剂盒（欧蒙印迹法）的检测模条上平行包被了高度纯化的自身抗原。用于体外定性检测人血清或血浆中的抗nRNP/Sm、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1)CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体 P 蛋白和 AMAM2 共14 种不同抗原 IgG 类抗体。欧蒙印迹法的实验原理如下：样本血清与包被抗原的检测膜条温育，假如标本为阳性血清，则血清中的自身抗体将与膜条相应位点上的自身抗原特异性结合。洗膜后添加碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗人 IgG（二抗），将与结合在膜条相应抗原位点上的自身抗体（一抗）结合，形成抗原-1st Ab-2nd Ab 复合物。最后，加入酶底物 NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-磷酸盐）显色，阳性血清在对应膜条抗原条带处原位可形成蓝紫色的化合物沉淀。二、实验材料1.包被抗原的检测膜条2.nRNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、PMScl、Jo-1、CENP B、PCNA 、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体 P 蛋白3.阳性对比：人 IgG，100 倍浓缩，4.酶结合物：碱性磷酸酶标记的羊抗人 IgG，10 倍浓缩，1x3ml5.样本缓冲液，直接使用，1x100ml6.清洗缓冲液，10 倍浓缩，1x 50ml7.底物液：NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐），直接使用，1×30ml8.温育盘 2x8 槽三、实验步骤（一）预处理试剂盒平衡至室温 30 分钟后使用，取出膜条。清洗缓冲液， 10 倍稀释：30mL 清洗缓冲液+270mL DW，50ml/支分装。血清样本，使用前 101X 稀释：血清 210uL +21mL 样本缓冲液→10mL/支，分装 2 支；按排一组作阳性对比： 阳性对比+2ml 样本缓冲液。AKP-羊抗人 IgG，使用前 10 倍稀释：AKP-羊抗人 IgG mL + 样本缓冲液→10mL/支，分装 2 支。（二）正式处理1. 预处理 5min用镊子取出膜条，数字面朝上放入温育槽中，每槽中加入 样本缓冲液；常温 摇床震荡 5min。2. 抗原和血清（1st 抗体）温育...
