维生素A和维生素E的测定方法

维生素 A 和维生素 E 的测定方法（HPLC） 杨月欣教授等高效液相色谱法 最小检出量分别为 VA：；α-E：；γ-E：；δ-E：。 1.原理 食物中的维生素 A 及维生素 E 经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。用 HPLC法测定维生素 A 及维生素 E 的含量。 2. 适用范围 GB12388-90 本法适用于各种食物和饲料的测定 3. 仪器 （1） 高压液相色谱仪（带紫外检测器） （2） 六孔恒温水浴锅 （3） 旋转蒸发器 （4） 高纯氮气 （5） 高速离心机 4. 试剂 本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水 无水乙醇：重蒸，不含有醛类物质 检查方法：取 2ml 银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入 10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。 脱醛方法：取 2g 硝酸银溶于少量水中。取 4g 氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入 1L 乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶蒸馏，弃去初蒸出的 50ml。当乙醇中： 10%抗坏血酸溶液（Vc） W/V 临用前配制 50%氢氧化钾溶液（KOH） W/V 无水乙醚 重蒸，不含过氧化物 4.4.1 过氧化物检查方法：用 5ml 乙醚加 1ml10%碘化钾溶液，振摇 1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加 4 滴%淀粉液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入铁丝或铁末少许。弃去 10%初馏液和 10%残馏液。 pH 1-14 试纸 无水硫酸钠 Na2SO4 甲醇 色谱纯或分析纯重蒸后使用 重蒸水 蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用 苯并〔e〕芘标准液 称取苯并〔e〕芘（纯度 98%），用脱醛乙醇配制成 1ml 相当于 5μg 苯并〔e〕芘的内标溶液。 维生素 A 标准液 视黄醇（纯度 85% Sigma 公司）用脱醛乙醇溶解维生素 A 标准品，使其浓度大约为1ml 相当于 1mg 视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。维生素 E 标准液 α-生育酚（纯度95% Sigma 公司），δ-生育酚（纯度 95% Sigma 公司），δ-生育酚（纯度 95% Sigma 公司）。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素 E 标准品，使其浓度大约为 1ml 相当于 1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素 E 的准确浓度。 5. 操作步骤 本实验需避光操作 (1) 样品皂化 称取样品于三角瓶中，加 30ml 无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀。加入 5ml 10%抗坏血酸和...