人3型腺病毒重组六邻体蛋白的纯化及免疫学研究

目 录中文摘要…………………………………………………………………………… 2英文摘要…………………………………………………………………………… 3文献综述…………………………………………………………………………… 4前言………………………………………………………………………………… 13实验材料…………………………………………………………………………… 15实验方法…………………………………………………………………………… 21实验结果…………………………………………………………………………… 27讨论………………………………………………………………………………… 32结论………………………………………………………………………………… 35参考文献…………………………………………………………………………… 36致谢………………………………………………………………………………… 41个人简历…………………………………………………………………………… 42中文摘要目的 腺病毒(Adenovirus,AdV)是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一，严重威胁着人类的健康。腺病毒导致小儿肺炎，尤其是 6 个月至 2 岁的婴幼儿腺病毒肺炎最为严重，感染主要是以 3, 5, 7 型为主,所以建立有效的防治腺病毒感染措施意义重大。六邻体是腺病毒主要的结构蛋白，能够刺激机体产生相应的抗体，抑制病毒体构象的改变，从而中和病毒体。本实验组已经成功克隆并表达了重组人 3 型腺病毒六邻体 L1、L2 亚基，本次实验旨在纯化重组六邻体亚基蛋白，检测其抗原性、特异性及体外保护情况。方法在原核表达系统 E.coli M15 中高效表达重组人 3 型腺病毒六邻体蛋白。利用 Ni-NTA 琼脂糖亲和层析柱进行蛋白纯化。用纯化的重组六邻体蛋白免疫新西兰家兔,利用免疫印迹技术检测其血清中抗体，鉴定该蛋白的免疫原性和反应原性。利用固定病毒-稀释血清方法进行中和实验，计算其中和抗体效价。结果 得到纯化的重组人 3 型腺病毒六邻体蛋白，该蛋白免疫动物后产生高效价抗体 ,达到 1：1024000，该抗体能与人 3 型腺病毒、含有该蛋白的重组工程菌株以及重组六邻体蛋白发生特异性的免疫印迹反应(Western blot)，不与 E.coli M15 菌株、BSA 蛋白、柯萨奇病毒和 Hela 细胞等反应，证明该重组六邻体蛋白具有良好的免疫原性和反应原性以及 3 型腺病毒特异性。在中和实验中，该抗体可以有效地中和人３型...