基因工程的基本操作程序

退出目录1.2 基因工程的基本操作程序 退出目录课前预习导学 目标导航 学习目标 重点难点 1.简述基因工程原理及基本操作程序。 2.记住目的基因导入受体细胞的方法。 3.理解目的基因检测与鉴定的方法。 重点: 基因工程基本操作程序的四个步骤。 难点: 1.从基因文库中获取目的基因。 2.利用 PCR 技术扩增目的基因。 退出目录预习导引 基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 一、目的基因的获取 1.目的基因主要是指编码蛋白质的基因。 2.获取目的基因的常用方法有以下几种: (1)从基因文库中获取目的基因。 将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。 基因文库包括两种:基因组文库,即包含一种生物所有基因的文库;部分基因文库,即只包含一种生物一部分基因的文库,如 cDNA 文库。 退出目录 (2)利用 PCR 技术扩增目的基因。 ①PCR 的含义:是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术。 ②目的:获取大量的目的基因。 ③原理:DNA 双链复制。 ④过程:第一步,加热至 90~95 ℃,DNA 双链完全分开; 第二步,冷却到 55~60 ℃,引物结合到互补 DNA 链; 第三步,加热至 70~75 ℃,Taq 酶从引物起始进行互补链的合成。 如此重复循环多次。 ⑤特点:指数形式扩增。 (3)用化学方法人工合成。 如果基因比较小,核苷酸序列又已知,也可以通过 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成。 退出目录预习交流 为什么要构建基因文库?直接从含目的基因的生物体内提取不行吗? 提示:构建基因文库是获取目的基因的方法之一,并不是唯一的方式。如果所需要的目的基因序列已知,就可以通过 PCR 方式以含有该基因的生物的 DNA 双链为模板直接获得,也可以通过反转录,用 PCR 方式以 mRNA 为模板反转录出来的 DNA 为模板获得,不一定要构建基因文库。但如果所需要的目的基因的序列完全不知,或只知道目的基因序列的一段,或想从一种生物体内获得许多基因,或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同,或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同,或者想得到一种生物的全基因组序列,往往就需要构建基因文库。 退出目录二、基因表达载体的构建 1.构建目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表...