名词解析1、原位 PCR(insituPCR):直接用细胞涂片或石蜡包埋组织切片在完整细胞中进行 PCR 抗增的方法
2、实时定量 PCR(qPCR):在反应中引入了荧光标记分子,在反应过程中对反应过程中每一时刻的产物量进行实时分析
3、易错 PCR(error-pronePCR):通过改变 PCR 条件,提高扩增产物的碱基错配率,从而获得与原来不同的 DNA 序列或基因
4、分子信标:是一种茎环结构的双标记寡核苷酸探针
在此结构中,位于分子一端的荧光基团与分子另一端的淬灭基团靠近
5、荧光阈值:在荧光扩增曲线指数增长期设定一个荧光强度标准(即 PCR 扩增产物量的标准)
如果检测到荧光信号超过阈值则被认为是真正的信号
荧光阈值通常设置为 3-15 个循环的荧光信号的标准差的 10 倍
6、Ct 值(循环阈值):PCR 扩增过程中,扩增产物(荧光信号)到达阈值时所经过的扩增循环次数
Ct 值与模板起始拷贝数(起始模板量)的对数呈线性关系,模板起始拷贝数越大,Ct 值越小
7、限制性核酸内切酶:是一类能识别双链 DNA 中的某些特定核苷酸序列,并由此切割 DNA双链的核酸内切酶,又称为内切酶或限制酶
8、限制性核酸内切酶的星号活性:限制酶在一些特定条件下使用时,对于底物 DNA 的特异性可能降低
即可以把与原来识别的特定的 DNA 序列不同的碱基序列切断
9、质粒(plasmid):是存在于细菌染色质以外,具有自我复制能力的双链环状 DNA
10、蓝白斑筛选:是重组子筛选的一种方法,是根据载体的遗传特征筛选重组子,主要为a-互补与抗生素基因
蓝白斑筛选在指示培养基上,未转化质粒的菌落因无抗生素抗性而不能生长,重组质粒的菌落是白色的,非重组质粒的菌落是蓝色的,以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法
11、转化:将质粒 DNA 或以质粒载体构建的重组 DNA 导入原核细胞细菌(大