XXXX年本科实验四 重组质粒DNA提取、双酶切鉴定

质粒 DNA 的制备限制性内切酶切割重组质粒朱文博中山医学院基因克隆定义： 经无性繁殖获得基因许多相同拷贝的过程。通常是将单个基因导入宿主细胞中复制而成。 基因工程定义： 实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为基因工程，又称重组 DNA 技术。基因克隆示意图 ÔØÌåDNA(ÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøÇпª)Ä¿µÄ»ùÒò£«ËÞÖ÷ϸ°û£«ÖØ×éÌåÒÑת»¯µÄËÞÖ÷ϸ°ûÑôÐÔ¿Ë¡Öê·±Ö³±í´ï分、切接转筛 基因载体基因工程中常用的载体 (vector) 主要包括质粒 (plasmid) 、噬菌体 (phage) 和病毒(virus) 柯斯质粒。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。 实验内容2. 限制性内切酶的酶切鉴定 (P82)3. 定性鉴定 :DNA的琼脂糖凝胶电泳4. 定量检测： DNA的紫外分光光度法测定 (P39)1. 质粒 DNA 的提取与纯化 (P70 碱法 )实验目的 掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用 ; 掌握核酸内切酶切割质粒的原理并学会运用内切酶一 . 质粒 DNA 的提取1 关于质粒的概念a. 什么是质粒（ plasmid ）？b. 质粒的本质是什么？c. 质粒有哪些构型？c. 质粒有哪些特点？d. 质粒的用途有哪些？81.1 质粒的定义 质粒是细菌细胞内一种自我复制的环状双链 DNA 分子，能稳定地独立存在于染色体外，并传递到子代，一般不整合到宿主染色体上。 在细胞内它们常以共价闭环的超螺旋形式存在。 9(1) 超螺旋 DNA (supercoiled DNA, SC DNA)1.2 质粒的三种构型10(2) 开环 DNA (open circular DNA, OC DNA) 如果两条链中有一条的一处或多处断裂，分子就能发生旋转而消除链的张力，形成松弛型的环状分子。11(3) 线状 DNA (linear DNA, L DNA): 如果两条链均断开，即为线状 DNA 。电泳时，三者泳动速度大小关系（？？？） 12最快中最慢1.3 质粒 DNA 的基本特征：(1) 自主复制性：能独立于染色体 DNA 外自主复制；(2) 可扩增性：严紧型复制 - 复制 1-5 个拷贝 松弛型复制 - 复制数十个拷贝；(3) 可转移性：通过细菌结合作用从一个宿主细胞转移到另一个宿主细胞；(4) 不相容性：具有相似复制子结构特征的两种不同质粒不能稳定地存在于同一受体细胞内。 141.4 理想的克隆载体：(1) 分子质量小、多拷贝、松弛控制型；(2) 具有多种常用的...