专题八 现代生物科技专题 第一讲 基因工程和细胞工程 高频考点整合 考点一 基因工程的操作步骤和应用 1．基因工程的操作步骤 (1)目的基因的获取 ①目的基因：编码蛋白质的结构基因。 ②目的基因的获取途径 a．从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因组文库或 cDNA 文库中获取。 b．人工合成目的基因：根据已知的核苷酸序列，利用原料以化学方法合成。常用的方法有反转录法和化学合成法。 c．利用 PCR 技术扩增目的基因 通过 PCR 技术可对已获取的目的基因进行扩增，以获取大量的目的基因。 (2)基因表达载体的构建(基因工程的核心) ①目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可遗传给下一代，并能够表达和发挥作用。 目的基因启动子：为RNA聚合酶识别和结合部位，驱动 转录mRNA终止子：使转录终止的特殊结构的DNA片段标记基因：可鉴别受体细胞是否含有目的基因 基因表达载体组成 ②③ 过程(3)将目的基因导入受体细胞 ①导入原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 ②导入过程 生物 种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用 方法 农杆菌转化法(主要)、基因枪法和花粉管通道法 显微注射技术 Ca2＋处理法 受体 细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转 化 过 程 将目的基因插入 Ti质粒的 T－DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的 DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA 分子 (4)目的基因的检测与鉴定 ①导入检测：DNA 分子杂交技术(即使用放射性同位素或荧光分子标记的 DNA 作探针进行检测)。DNA和 DNA 之间，看是否出现杂交带。 ③个体生物学水平鉴定。例如：抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能是否相同。 转录检测：分子杂交技术， DNA 和 mRNA 之间，看 是否出现杂交带翻译检测：抗原—抗体杂交，看是否出现杂交带 ② 表达检测 2．基因工程的应用 (1)植物基因工程 抗虫转基因植物——减轻农药对环境 的污染抗病转基因植物抗逆转基因植物改良植物品质 (2)动物基因工程 提高动物生长速度改善畜产品的品质用转基因动物生产药物用转基因动物作器官移植的供体基因工程药品的生产 (3)基因治...
