第 43 讲 生物化学与分子生物学技术实践[考纲要求] 1.蛋白质的提取和分离。2.PCR 技术的基本操作和应用。3.从生物材料中提取某些特定的成分。考点一 蛋白质的分离与纯化技术[重要程度：★☆☆☆☆]1． 纯化原理蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度、所带电荷的多少、吸附性质等方面存在差异。2． 纯化方法(1)薄膜透析法① 原理：蛋白质水溶液具有亲水胶体溶液性质，不能透过半透膜。② 目的：去除小分子化合物杂质，如无机盐、单糖、双糖、氨基酸等。③ 常用的半透膜：肠衣、玻璃纸。④ 步骤：将待纯化的蛋白质溶液装入透析袋内，再把透析袋放入透析液中即可。(2)离心沉降法① 原理：在离心力的作用下，分子大小、密度不同的分子沉降速度不同，从而被分离。② 目的：使分子大小、密度不同的不同种类的蛋白质彼此分离。(3)电泳① 概念：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。② 原理：不同的物质所带电荷不同，颗粒的大小、形状不同，因此，在电场中的泳动速度不同。③ 影响泳动的因素：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的 pH 等因素。④ 泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。⑤ 支持物：滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。1． 薄膜透析法(1)过程：取 1 mL 的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有 300 mL 的物质的量浓度为 20 mmol/L 的磷酸缓冲液中(pH 为 7.0)，透析 12 h。(2)图示：12． 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳(1)血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳流程2(2)结果及其分析① 结果② 结果分析从电泳图谱示意图中可以看出：a.血清蛋白主要包括五种蛋白质，且含量最多的是清蛋白，其他依次是： γ 球蛋白 >α 1球蛋白 >α 2球蛋白 >β 球蛋白 ；由五种蛋白质所处的位置可判断出它们均带有负电荷，且四种球蛋白的电量大小依次为：α1球蛋白 >α 2球蛋白 >β 球蛋白 >γ 球蛋白 。1． 仔细观察下图，所带负电荷少的球蛋白是( )A．α1球蛋白 B．α2球蛋白C．β球蛋白 D．γ球蛋白答案 D解析 对于几种球蛋白来说直径相差不大，引起泳动速度的差异主要来自于所带电荷多3少，由图可知球蛋白由右向左泳动，因右侧为负极，且 γ球蛋白距点样处最近，所以 γ球蛋白所带负电荷最少。2． 关于蛋白质提取的叙述中，不正确的是( )A．分离与...
