直击考纲1.基因工程的诞生(Ⅰ)。2.蛋白质工程(Ⅰ)。3.动物的细胞培养与体细胞克隆(Ⅰ)。4.基因工程的原理及技术(Ⅱ)。5.基因工程的应用(Ⅱ)。6.植物的组织培养(Ⅱ)。7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ)。1．判断下列有关基因工程的叙述(1)生长激素基因在转录时需要解旋酶和DNA连接酶(2012·四川，2D)(×)(2)一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列(经典高考题)(√)(3)每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点(2011·浙江，6B)(√)(4)应用DNA探针技术可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达(2011·四川，5D)(×)(5)用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸(2010·浙江，2A)(×)(6)自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上，属于基因工程(2010·大纲全国Ⅱ，5D)(×)(7)转抗虫基因的植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增加(2010·江苏，18B)(×)(8)限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶(2009·浙江，3B)(√)2．判断下列有关细胞工程的叙述(1)培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压(2008·江苏，20A)(√)(2)去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理(2008·全国Ⅰ，5B)(√)(3)不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程(2009·全国Ⅰ，4B)(√)(4)利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制，培育远缘杂种(2009·全国Ⅰ，4A)(√)(5)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞(2010·浙江，4A)(×)(6)克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变(2010·浙江，4B)(×)(7)二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的(2010·浙江，4C)(×)(8)恶性细胞系的细胞可进行传代培养(2010·浙江，4D)(√重点一基因工程1．完善如下基因工程的主干知识图解(1)目的基因的获取(2)基因表达载体的构建(目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因)3将目的基因导入受体细胞导入植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法导入动物：显微注射法导入微生物：感受态细胞法用Ca2＋处理(4)目的基因的检测与鉴定插入检测：DNA分子杂交,转录检测：DNA—RNA分子杂交翻译检测：抗原—抗体杂交)),个体水平检测——抗性接种实验2．基本工具限制酶DNA连接酶载体作用切割目的基因和载体拼接DNA片段，形成重组DNA携带目的基因进入受体细胞作用部位两个核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键作用特点(条件)识别特定的核苷酸序列；在特定位点上切割E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端；T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；有多个限制酶切割位点；具有特殊的标记基因3.基因表达载体的构建过程技能点拨1．区分DNA连接酶和DNA聚合酶、限制性核酸内切酶和解旋酶(1)DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。(2)限制性核酸内切酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开，而解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。2．启动子和终止子启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，启动转录；终止子是终止转录的位点。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前需要有启动子，后需要有终止子。3．区分一个至多个限制酶切点与每种酶一个切点(1)一个至多个限制酶切点：作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，以便与外源基因连接。(2)每种酶一个切点：每种酶的切点最好只有一个。因为某种限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点，则切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体若只有某种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段，又不会丢失自己的片段。4．根据受体种类确定基因工程的受体细胞受体种类不同，所用的受体细胞种类也不相同。(1)植物：由于植物细胞具有全能性，植物体细胞经过植物组织培养能够形成植物体，所以植物的受体细胞一般是体细胞。(2)动物：由于动物细胞没有全能性，不能由一个体细胞培养成一个个体，所以动物基因工程的受体细胞不是体细胞，而是受精卵。...
