基因工程基因工程（生物技术）是狭义的遗传工程。核心是构建重组 DNA 分子 ，故也称重组 DNA 技术。工具酶的发现和基因工程的诞生理论基础：是生物遗传物质的发现。双螺旋结构的确立。3.遗传信息传递方式的认定。限制性核酸内切酶：能够识别和切割 DNA 分子内一小段特别核苷酸序列的酶。DNA 连接酶 质粒（载体）：具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子，在细菌之中独立于拟核之外。常用大肠杆菌质粒，这种质粒常含有抗生素抗性基因（作为标记基因）。 除质粒外载体还有噬菌体、植物病毒和动物病毒（均为 DNA 病毒）基因工程的原理和技术基本原理：让人们感兴趣的基因（即目的基因）在宿主细胞在稳定和高效地表达。基本操作步骤：1.猎取目的基因 。 目的基因的序列已知：1.化学方法合成。2.逆转录法（以 m-RNA 为模板，在逆转录酶作用下人工合成）。3.用聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因。 目的基因的序列未知：从基因文库（包括 DNA 分子的所有基因）中猎取2.形成重组 DNA 分子 用相同的限制酶切割目的基因和载体 DNA3.将重组 DNA 分子导入受体细胞 常用的转化方法： 导入植物细胞：农杆菌转化法（农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。原理：Ti 质粒上的 t-DNA 可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的 DNA 上），其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。 导入动物细胞：显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。 导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ，其转化方法是：先用氯化钙处理细胞，使其成为 感受态细胞 ，再将 重组表达载体 DNA 分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收 DNA 分子，完成转化过程。4.筛选含有目的基因的受体细胞 依据：标记基因（或目的基因）是否表达5.目的基因的表达 目的基因是否插入：DNA 分子杂交 ，看是否出现杂交带 目的基因是否转录出了 m-RNA：核酸分子杂交目的基因是否翻译成蛋白质：抗原 - 抗体杂交 个体生物学水平的鉴定：抗虫、抗病接种实验基因工程的应用基因工程与遗传育种（农牧业） 转基因植物：解决传统育种方法所需时间较长，且远缘亲本难以杂交的问题。 转基因动物基因工程与疾病治疗（医药工业和医学领域） 基因工程药物： 胰岛素（注射）：蛋白质激素，治疗胰岛素依赖...
