免疫组织化学得概念: 免疫组化就是利用抗原与特异性结合得原理,通过化学反应使标记得显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽与蛋白质),对其进行定位、定性及定量得讨论,称为免疫组织化学、 ﻫ免疫组化实验所用得有哪些？ ﻫ免疫组化实验中常用得抗体为单抗体与多抗体。单抗体就是一个 B 淋巴细胞分泌得抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体就是将纯化后得抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得得免疫血清,就是多个 B 淋巴细胞克隆所产生得抗体混合物、 免疫组化实验所用得组织与细胞标本有哪些？ 实验所用主要为组织标本与细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片与组织芯片)与冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片与细胞涂片、 ﻫ其中石蜡切片就是制作组织标本最常用、最基本得方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对比观察;还能长期存档,供回顾性讨论;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定得影响,但可进行抗原修复,就是免疫组化中首选得组织标本制作方法。 石蜡切片为什么要做抗原修复？有哪些方法? ﻫ石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行 IHC 染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成得交联破坏,而恢复抗原得原有空间形态。 ﻫ常用得抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用得修复液就是 pH ６。0 得 0、01 ｍ ol／Ｌ得柠檬酸盐缓冲液。 ﻫ免疫组化常用得染色方法有哪些？ ﻫ根据标记物得不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲与组织化学法,后者就是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础得检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平得定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用、 ﻫ抗体交叉反应得原因: ﻫ指抗体除与其相应得抗原发生特异性反应外还与其它抗原发生反应。产生得原因有以下几个方面: 1、 抗原特异性指用于免疫动物得抗原性物质中含有多种抗原分子,它引起动物产生针对多种抗原分子特异性得相应抗体。任何其它物质只要含有一种或多种与上述物质相同得抗原分子,必将与上述多特异性得抗血清发生交叉反应、 ﻫ2. 共同决定簇即两种抗原分子中都含有相同得抗原决定簇。 3、 决定簇相似,两种不同得抗原决定簇,假如结构大致相同,由于空间构象关...
