单克隆抗体制备实验过程 一、 免疫动物 免疫动物就是用目得抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏 B 淋巴细胞得过程。 一般选用 6-8 周龄雌性Ｂ alb/c 小鼠,根据预先制定得免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应 B 淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B 淋巴细胞。 说明:FCA，弗氏完全佐剂；FI Ａ，弗氏不完全佐剂;Qui ｃ kan ｔ ib ｏ dy,北京康碧泉公司研制得佐剂。上表中第四种免疫方法产生得抗体大部份都为 I ｇ M，存在亲与力弱等缺点,慎用。 PS:1、一般皮下注射每个注射点注射 3 ０—50 ｕ l 左右混有佐剂得抗原，每只小鼠注射 6-８个点为宜。 2、腹腔注射时,假如抗原混有弗氏佐剂,建议注射在左侧腹腔,假如采纳右侧腹腔注射,则在免疫过程中，很容易导致小鼠脾脏与腹膜粘连得情况,造成后期取出脾脏麻烦. 3、冲击免疫完成后，应在 9 ６小时内完成细胞融合，否则相应得 B 细胞数量会下降到未冲击前得水平。 二、细胞融合 (Ｃ el ｌ fusion)【材料与试剂】 （1）骨髓瘤细胞悬液 选好骨髓瘤细胞株,取体外培育对数生长期细胞或体内生长得肿瘤分离骨髓瘤细胞,制备细胞悬液。 (2）免疫小鼠脾细胞悬液 取３天前加强免疫得小鼠,眼眶放血，分离血清冻存备用。拉颈处死小鼠，浸泡于 75%酒精中 3～5mi ｎ.无菌操作取出脾脏，置入盛有 5m ｌ不完全培育液得平皿中洗涤，剪去周围得结缔组织，将脾脏移入另一盛有 5ml 不完全培育液得平皿中得钢网上,先用剪刀剪成 3~５个小块,然后用注射器内芯研磨。将脾脏细胞悬液移至 5 ０ｍ l 离心管中，加不完全培育液 50mｌ,１ 000r/ｍ in 离心 5min,弃上清，再以同法洗涤离心一次。然后将沉淀细胞重新悬浮于 1 ０ m ｌ不完全培育液中,计活细胞数,一般一只小鼠可得 0、5～2×108 个脾细胞。（3）饲养细胞 将小鼠致死、体表消毒与固定后，用消毒剪镊从后腹掀起腹部皮肤，暴露腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜消毒.用注射器注射１ 0m ｌ不完全培育基至腹腔,注意避开穿入肠管。右手固定注射器,使针头留置在腹腔内，左手持酒精棉球轻轻按摩腹部 1 分钟，随后吸出注入得培育液。1 ０ 0 ０ｒ/m ｉ n 离心５-10 分钟,弃上清。先用 5ml Ｈ A Ｔ培育基将沉淀细胞悬浮,根据细胞计数结果，补加ＨＡ T 培育基,使细胞浓度为 2×105／ml,备用。（4）主要试剂得配制① 细胞培育基杂交瘤技术中使用得细胞培...
