在组织中检测细胞增殖、分化与凋亡得方法一、检测细胞增殖得方法(1)直接方法：通过直接测定进行分裂得细胞来评价细胞得增殖能力1、胸腺嘧啶核苷(3H-Td Ｒ）渗入法 胸腺嘧啶核苷（Td Ｒ)就是Ｄ NA 特有得碱基，也就是 DNA 合成得必需物质。用同位素 3H 标记Ｔ dR 即 3H—Td Ｒ作为 DNA 合成得前体能掺入 D Ａ N 合成代谢过程,通过测定细胞得放射性强度，可以反映细胞 D Ａ N 得代谢及细胞增殖情况.但就是具有放射性。2、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CF Ｓ E）就是一种可穿透细胞膜得荧光染料,具有与细胞特异性结合得琥珀酰亚胺脂基团与具有非酶促水解作用得羟基荧光素二醋酸盐基团,使 C Ｆ SE 成为一种良好得细胞标记物。Ｃ FSE 进入细胞后可以不可逆地与细胞内得氨基结合偶联到细胞蛋白质上．当细胞分裂时，CFsE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度就是亲代细胞得一半。这样,在一个增殖得细胞群中,各连续代细胞得荧光强度呈对递减,利用流式细胞仪在 488nm 激发光与荧光检测通道可对其进行分析。3、Brdu 检测法 Brdu 中文全名 5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶得衍生物,可代替胸腺嘧啶在Ｄ NA合成期(Ｓ期),活体注射或细胞培育加入,而后利用抗 Brd ｕ单克隆抗体,Ｉ C Ｃ染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色，可推断增殖细胞得种类，增殖速度,对讨论细胞动力学有重要意义4、增殖标志检测有些抗原 只存在于增殖细胞中,而非增值细胞缺乏这些抗原，您也可以通过特异性得单抗来对细胞增殖进行检测。例如,在人体细胞中，K ｉ-6 ７抗体识别同名蛋白，在细胞周期Ｓ期、Ｇ 2 期与 M 期表达,而在 G0 期与 G1 期(非增殖期）不表达.用针对Ｋ i-67 蛋白得单抗就可以检测细胞得增值情况。由于需要组织切片,这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症讨论者们得青睐,因为它能够用来检测体内肿瘤细胞得增殖。其她普遍使用得细胞增殖或细胞周期调控标志还包括,增殖细胞核抗原 PCNA、拓扑异构酶 II Ｂ与磷酸化组蛋白Ｈ３。(2）间接方法:通过检测样品中健康细胞得数目来评价细胞得增殖能力1、Ｍ TT 检测法 MTT 检测法主要反映细胞得能量代谢，就是检测细胞增殖活力得一种简便准确得方法,其原理就是在活细胞生长与增殖过程中,线粒体内得脱氢酶可将黄色得 MTT 分解成兰紫色得甲(F ｏｒｍａ zan),生成得甲...
