HE染色方法与步骤吐血整理

HE 染色试剂配置A：0、5~1%得伊红酒精溶液：称取伊红 Y0、5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以 95%酒精（即工业酒精，假如不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。B：苏木素染液配方：(配制 3000ml，可按比列减少)苏木精 6g无水乙醇 100ml硫酸铝钾 150g蒸馏水 2000ml碘酸钠 1、2g冰醋酸 120ml甘油 900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸与碘酸钠。C：1%盐酸酒精分化液：将 1 毫升浓盐酸加入 99 毫升 70%酒精中即可。染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇 5min(7)蒸馏水 5min(8)苏木精液染色 5min(9)流水稍洗去苏木精液 1-3s(10)1%盐酸乙醇 1-3s(11)稍水洗 10-30s(12)蒸馏水过洗 1-2s(13)0、5%伊红液染色 1-3min(14)蒸馏水稍洗 1-2s(15)80%乙醇稍洗 1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇 5-10min(19)石炭酸二甲苯 5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至 20-30min。② 第（21）步假如不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。*冷冻切片 HE 染色步骤：（1）冰冻切片固定 10～30s（2）稍水洗 1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液 5～10s（5）1%盐酸乙醇 1～3s（6）稍水洗 1～2s（7）促蓝液返蓝 5～10s（8）流水冲洗 15～30s（9）0、5%曙红液染色 30～60s（10）蒸馏水稍洗 1～2s（11）80%乙醇 1～2s（12）95%乙醇 1～2s（13）无水乙醇 1～2s（14）石炭酸二甲苯 2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。注：第（14）步假如不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维与红细胞呈深浅不一得红色。4．12 切片脱水透明切片经 HE 染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。假如脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片 1-2 级无水乙醇脱水，也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。5、H-E 染色评定标准：（1）切片完整，厚度 4...