分子生物学实验思考题答案(3 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。分子生物学实验思考题答案实验一、基因组 DNA 的提取1、为什么构建 DNA 文库时，一定要用大分子 DNA? 答、的大小(即数目)取决于基因组的大小和片段的大小，片段大则文库数目小一些也可以包含 99%甚至以上的基因组。而文库数目小则方便讨论人员操作和文库的保存。所以构建文库要用携带能力大的载体尽量大的 DNA 片段.2、如何检测和保证 DNA 的质量？ 答、用看，有没有质白质和 RNA 等物质的污染，还可以测 OD，用 OD260/280 来推断， 当 OD260/OD280< 1.8，表示蛋白质含量较高 当 OD260/OD280> 2.0，表示 RNA 含量较高 当 OD260/OD280=1.8～2.0，表示 DNA 较纯。实验二、植物总 RNA 的提取1、RNA 酶的变性和失活剂有哪些？其中在总 RNA 的抽提中主要可用哪几种？ 答、有 DEPC,Trizol，氧钒核糖核苷复合物，RNA 酶的蛋白抑制剂以及 SDS，尿素，硅藻土等；在总 RNA 提取中用 PEPC,Trizol 2、怎样从总 RNA 中进行 mRNA 的分离和纯化。 答、、利用成熟的 mRNA 的末端具有 polyA 尾的特点合成一段 oligo(dT)的引物，根据碱基互补配对原则，可将 mRNA 从总 RNA 中分离出来 实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备1、感受态细胞制备过程中应该注意什么？ 答、A）细菌的生长状态：不要用经过多次转接或储于4℃的培育菌，最好从-80℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备的菌液。细胞生长密度以刚进入时为宜，可通过监测培育液的OD600 来控制。DH5α菌株的OD600为0.5时，细胞密度在5×107 个/mL左右，这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。 B）所有操作均应在无菌条件和冰上进行；实验操作时要格外小心，悬浮细胞时要轻柔，以免造成菌体破裂，影响转化。 C）经CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）； D） 化合物及的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或 Co2+）、DMSO或等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（100-1000倍）； E）所使用的器皿必须洁净。少量的或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；2、感受态细胞制备可用在哪些讨论和应用领域？ 答、在中将导入受体细胞是假如受体细胞是细菌则将它用Ca2+处理变为质粒进入。实验五、质粒...
