小鼠脾细胞悬液制备(2 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。小鼠脾细胞悬液制备一、小鼠眼球取血（眼静脉取血）二、小鼠脾细胞悬液的制备： 1． 小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡 3 分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；2． 在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；3． 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏。放入盛有 5ml Hanks 液的培育皿中；4．A：梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避开将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸入离心管中，自然沉降 5 分钟，将悬液移至另一离心管中，弃去较大的组织块，离心沉淀细胞；B：钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（100或 200 目）上，用注射器针芯轻轻研压脾脏，获细胞悬液；C：酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入 400 u/ml 胶原酶（III 型）5ml/只脾脏，37 度消化20 分钟，用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。 5、脾脏研磨：轻轻研压（顺同一方向），用吸管吸取脾细胞悬液，放入试管中。6、镜下细胞计数：40 倍镜头，观察脾细胞。7、试取胸腺注： 一般 6-8 周龄小鼠，根据品系不同，可得 5-20×107细胞/只。 2． 手术器械灭菌：术前高压灭菌外，也可将手术器械泡在 95%酒精的小容器中，使用前取出器械，在酒精灯上烧灼去除酒精，即可保证无菌，此法较为简便。【。';—）>【》《！`）>—^…：`#|·;…—、？；@-
