小鼠精子畸形试验

小鼠精子畸形试验(3 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。小鼠精子畸形试验一、目的与要求1. 熟悉精子畸形的概念及类型、精子畸形试验的实验设计、试验检测的遗传学终点。2. 学习和掌握小鼠精子畸形试验的基本方法步骤，正常精子及畸形精子的镜下观察。3. 了解精子畸形试验数据整理、分析方法及结果的评价。二、实验原理精子的畸形主要是指精子形态的异常改变，大、小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及 X、Y 性染色体基因直接或间接地决定精子形态。因此精子形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。大、小鼠精子畸形试验可检测受试物对于精子生成、发育的影响，而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性，故精子畸形试验可用作检测受试物在体内对生殖细胞的致突变作用。三、实验设计1. 动物选择：一般采纳小鼠，因为小鼠比较经济，且有大量的实验结果证实小鼠在该实验系统中对受试物最为敏感。6~8 周龄（体重 25~35g），雄性。每组应保证至少有 5 只存活小鼠。2. 染毒途径：多用腹腔注射，也可采纳与人体实际接触化学毒物相同的途径，如经口、吸入及皮肤接触等。3. 染毒次数及取样时间：可采纳 1 次或每天 1 次连续 5 天的方法进行染毒。各种化学毒物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种化学毒物后不同时间出现精子畸形，故有条件时，可于给受试物后第 1、4、10 周处死动物，检查精子形态。因为大部分化学毒物对精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞较为敏感，故一般均是于首次给受试物后的第 35 天处死。4. 剂量选择：至少设置 3 个剂量组。最高剂量组 5 天总剂量应能使部分动物死亡，一般可取 1/2 LD50为高剂量组，然后以 1/2~1/4 递减作为中、低剂量组。另设溶剂对比组（阴性对比组）和阳性对比组。阳性对比组可用环磷酰胺（20 mg/kg）或甲基磺酸甲酯（75 mg/kg）或甲基磺酸乙酯（60 mg/kg）进行腹腔注射，每天 1 次，连续 5 天。四、操作步骤1. 制片颈椎脱臼处死小鼠，取出双侧附睾，将附睾放入 1 ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水中。用眼科剪将附睾纵向剪 1~2 下，静止 3~5 min，轻轻摇动。用 4 层擦镜纸或合成纤维血网袋滤除组织碎片，吸取此精子悬液滴于清洁载玻片一端，均匀推片，待玻片晾干后用甲醇固定 5min 以上，自然晾干。用 1 %~2 %伊红染色 1 小时，用水轻冲，干燥。2. 阅片在低倍镜下找到背景清楚、精子...