欧蒙印迹法检测ANA抗核抗体 实验报告

实验１:抗Ａ N Ａ自身抗体得检测(欧蒙斑点法)一、实验目得及原理抗核抗体(ant ｉ nuclear an ｔ ibod ｙ,Ａ NA)就就是一组针对细胞核成分得自身抗体。ANA 阳性提示患有自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病、干燥综合症、全身性硬皮病、原发性胆汁性肝硬化等。根据细胞内各分子得理化特性和分布部位,A Ｎ A 可分为抗 DNA 抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体和抗其她细胞成分抗体。在本实验中,抗核抗体谱(I ｇ G)检测试剂盒(欧蒙印迹法)得检测模条上平行包被了高度纯化得自身抗原。用于体外定性检测人血清或血浆中得抗 nR Ｎ P/Sm、Sm、SS-Ａ(天然 SS－A 和 Ro-5 ２)、S Ｓ-B、S ｃｌ-7 ０、PM－Scl、J ｏ-１)CENPB、Ｐ CN Ａ、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体 P 蛋白和 AM Ａ M2共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。欧蒙印迹法得实验原理如下:样本血清与包被抗原得检测膜条温育,假如标本为阳性血清,则血清中得自身抗体将与膜条相应位点上得自身抗原特异性结合。洗膜后添加碱性磷酸酶(AP)标记得羊抗人 Ig Ｇ(二抗),将与结合在膜条相应抗原位点上得自身抗体(一抗)结合,形成抗原-１ s ｔ Ab-2nd Ab 复合物。最后,加入酶底物 NBT/BCIP(四唑硝基苯胺兰／５－溴-4-氯啶-磷酸盐)显色,阳性血清在对应膜条抗原条带处原位可形成蓝紫色得化合物沉淀。二、实验材料1. 包被抗原得检测膜条2. ｎＲ NP/Ｓ m、Sm、S Ｓ－A、SS-Ｂ、Sc ｌ－７ 0、Ｐ M Ｓ cl、J ｏ-１、CENP Ｂ、P Ｃ NA 、dsD Ｎ A、核小体、组蛋白、核糖体 P 蛋白3. 阳性对比:人 IgG,１ 00 倍浓缩,1x0、０ 2m ｌ4. 酶结合物:碱性磷酸酶标记得羊抗人 IgG,10 倍浓缩,1x3ml5. 样本缓冲液,直接使用,1 ｘ１ 00m ｌ6. 清洗缓冲液,10 倍浓缩,1x 5 ０ m ｌ7. 底物液:NBT/BCIP(四唑硝基苯胺兰／5－溴－4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐),直接使用,1×30 ｍ l8. 温育盘 2x8 槽三、实验步骤(一)预处理 试剂盒平衡至室温 3 ０分钟后使用,取出膜条。 清洗缓冲液, 10 倍稀释:3 ０ mL 清洗缓冲液＋270mL DW,50ml/支分装。 血清样本,使用前 10 １ X 稀释:No、16 ６ 6 血清 21 ０ uL +2 １ｍ L 样本缓冲液→１ 0mL／支,分装 2 支;按排一组作阳性对比: 0、０ 2ml 阳性对比＋2ml 样本缓冲液。 Ａ KP-羊抗人Ｉ gG,使用前 10 倍稀释:A Ｋ P-羊抗...