4、1 光度分析法[5] [6]β－氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸得条件下可以生成蓝紫色物质 ［７],其颜色深浅主要与 β-氨基丙酸得浓度有关。因此可利用此显色反应采纳比色法定量测量 β-氨基丙酸。我在实验中发现很多因素如浓度、pH 值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大得影响。如忽视这些因素会使实验产生很大得误差。就此显色反应得最佳条件我做了初步得探究。4、1、1 试剂得配制:缓冲液得配制:配制 pH= ６、00 得Ｎ a Ａ c-HAc 缓冲溶液 β－氨基丙酸标准溶液得配制:用电子天平准确称取 1、020 gβ-氨基丙酸(生化纯),溶于２ 50ml pH=6、00缓冲溶液中,得到 C = ４、080 g/L 标准溶液。茚三酮试剂得配制:称取 0、5g 茚三酮溶于 100 ｍ l 蒸馏水中,得到 5g／Ｌ得茚三酮水溶液。4、１、２标准曲线得确定分 别 准 确 移 取 0 、 30ml 、 ０ 、 40ml 、 0 、 50 ｍ l 、 0 、 60m ｌ 、 ０ 、70ml、0、80 ｍ l、0、90ml、１、00ml 标准液于８个比色管中,用 pH=6、00 得缓冲溶液稀释到５、0 ０ ml 再加入 1ml 茚三酮水溶液充分摇匀,将其放在沸水浴中加热１ 0m ｉ n。冷却到室温,用７２３ 0 型分光光度计在 5 ６ 9n ｍ下测其吸光度。以吸光度和浓度作一个标准曲线。4、1、3 样品得测定稀释待测液于 0、24mg/m ｌ—0、73mg/ｍ l,调ｐＨ值到 6、00,以相同得反应条件,测其吸光值并与上面得标准曲线对比查出稀释液得浓度,再乘以稀释倍数即为 β-氨基丙酸得浓度。4、1、4 标准曲线得测定结果β-氨基丙酸浓度在０、24mg/ml—0、７ 3m ｇ/ml 范围内与茚三酮水溶液反应,颜色表现出由浅蓝到深蓝得递增变化。用茚三酮比色法测得得一组数据得到得标准曲线如图 1:图 1 标准曲线得测定Fig 1 Dete ｒｍ inatio ｎ o ｆ the standard c ｕ rve注:在沸水中加热 10 ｍｉ n,β-氨基丙酸标准溶液 5ml、茚三酮水溶液１ m ｌ、缓冲溶液 pH＝６、00４、1、5 样品得测定分析将待测得一批稀释 50 倍,母液稀释得程度可以根据以与标准溶液在相同得反应条件下反应,再观察样品得显色程度而确定。取稀释后得产物液１ｍｌ ,用pH=6、00 得缓冲液稀释到 5 ｍ l 再加入 1m ｌ茚三酮水溶液,在沸水中加热 10mｉｎ,测得如下数据如表３:表 3 样品得测定Ｔａ ble ３ Ｄ e ｔ er ｍ in ａｔｉｏｎ o ｆ sam ｐ le待测液序号待测液所对应得反应...
