蛋白质检测方法

蛋白质得检测(参考 GB/Ｔ 6 ４ 32-9 ４)一、原理凯氏定氮法测定试样中得含氮量,即在催化剂作用下,用浓硫酸破坏有机物,使含氮物转化为硫酸铵、加入强碱进行蒸馏使氮溢出,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数６。25,计算出粗蛋白含量。二、试剂（1） 硫酸 化学纯,含量为９ 8%,无氮;（2） 混合催化剂 ０.4g 硫酸铜,含５个结晶水,6g 硫酸钾或硫酸钠,均为化学纯,磨碎混匀;（3） 氢氧化钠 化学纯,4 ０%水溶液(m/Ｖ);（4） 硼酸 化学纯,２％水溶液(m/V);（5） 混合指示剂 甲基红 0。1％乙醇溶液,溴甲酚绿 0.5％乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为 3 个月;（6） 盐酸标准溶液 基准无水碳酸钠法标定;a)0、1mol/l 盐酸标准溶液:８、3 ｍＬ盐酸注入 1 ０ 00 ｍ L 蒸馏水中。b)０。0 ２ mol／l 盐酸标准溶液:1.67 ｍ L 盐酸注入 1 ０ 00m Ｌ蒸馏水中、（7） 蔗糖 分析纯;（8） 硫酸铵 分析纯,干燥;（9） 硼酸吸收液 1％硼酸水溶液 1 ０ 00mL,加入 0、1%溴甲酚绿乙醇溶液 1 ０mL,0.1%甲基红乙醇溶液 7 ｍ L,4％氢氧化钠水溶液,混合,置阴凉处保存期为 1 个月(全自动程序用)、三、仪器设备（1） 实验室用样品粉碎机或研钵;（2） 分样筛 孔径０、45mm(40 目);（3） 分析天平 感重 0、0001 ｇ;（4） 消煮炉或电炉;（5） 滴定管 酸式,1 ０、２ 5mL;（6） 凯氏烧瓶 250m Ｌ;（7） 凯氏蒸馏装置 常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式;（8） 锥形瓶 15 ０、２ 50mL;（9） 容量瓶 100m Ｌ;（10） 消煮管 2 ５ 0mL;（11） 定氮仪 以凯氏原理制造得各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。四、分析步骤（一） 仲裁法1. 试样得消煮 称取试样 0。5－１ g(含氮量 5－80mg)(精确至 0、０ 0 ０２ｇ),放入凯式烧瓶中,加入 6、４ｇ混合催化剂,与试样混合均匀,再加入 12mL 硫酸与 2 粒玻璃珠,将凯式烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化、泡沫消逝后,再加强活力(3 ６ 0-４ 10℃)直至呈透明得蓝绿色,然后再继续加热,消化全过程至少 2h。2. 氨得蒸馏（1） 常量蒸馏法 将试样消煮液冷却,加入６ 0-10 ０ m Ｌ蒸馏水,摇匀,冷却、将蒸馏装置得冷凝管末端浸入装有 2 ５ mL 硼酸吸收液与 2 滴混合指示剂得锥形瓶内。然后小心地向凯式烧瓶中加入 5 ０ mL 氢氧化钠溶液,轻轻摇动凯式烧瓶,使溶液混匀后再加热蒸馏,直至流出液体体积为 100 ｍＬ...