基因工程考点一 基因工程的操作工具1．限制性核酸内切酶(简称限制酶)(1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。(2)作用：识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。(3)结果：产生黏性末端或平末端。2．DNA 连接酶种类E·coli DNA 连接酶T4DNA 连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体特点只缝合黏性末端缝合黏性末端和末端作用恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键3．载体(1)作用：携带外源 DNA 片段进入受体细胞。(2)种类：质粒、λ 噬菌体的衍生物、动植物病毒等。(3)条件[基础自测]1．判断下列叙述的正误(1)切割质粒的限制性核酸内切酶均能特异性地识别 6 个核苷酸序列(×)(2)载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因(×)(3)限制酶只能用于切割目的基因(×)(4)DNA 连接酶能将两碱基间通过氢键连接起来(×)(5)限制性核酸内切酶、DNA 连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶(×)(6)E·coli DNA 连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端(×)(7)用于载体的质粒 DNA 分子上至少含一个限制酶识别位点(√)(8)载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在并表达(√)2．载体需具备的条件及其作用(连线)3．据两种限制酶的作用图示填空(1)已知限制酶 EcoRⅠ 和 SmaⅠ 识别的碱基序列和酶切位点分别为 G↓AATTC 和CCC↓GGG，在图中画出两种限制酶切割 DNA 后产生的末端。(2)写出产生的末端的种类：①产生的是黏性末端；②产生的是平末端。(3)EcoRⅠ 限制酶和 SmaⅠ 限制酶识别的碱基序列不同，切割位点不同(填“相同”或“不同”)，说明限制酶具有专一性。4．学透教材、理清原因、规范答题用语专练(1)① 是________酶，②是____________酶，二者的作用部位都是______________。(2)限制酶不切割自身 DNA 的原因：__________________________________________。答案：(1)限制 DNA 连接 磷酸二酯键 (2)自身 DNA 不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰1.与 DNA 有关的酶的比较名称作用部位作用底物作用结果限制酶磷酸二酯键DNA将 DNA 切成两个片段DNA 连接酶磷酸二酯键DNA 片段将两个 DNA 片段连接为一个 DNA 分子DNA 聚合酶或热稳定DNA 聚合酶磷酸二酯键脱氧核苷酸将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端DNA(水解)酶磷酸二酯键DNA将 DNA 片段水解为单个脱氧核苷酸解旋酶碱基对之间的氢键DNA将双链 DNA 分子局部解旋为单链，形成两条...
