S Ｄ S-PAG Ｅ失败实例及分析症状１——涂抹痕迹（smears)涂抹痕迹——例 1ﻫ涂抹痕迹可能由于多种原因引起,但就就是最常见得原因就就是聚丙烯酰胺凝胶倒胶得不均匀或者上样量过大。ﻫ这块胶倒胶不正确,在上部胶倒入制胶槽之前就已经发生聚合。首先倒入得胶聚合发生得太快了。与其重新倒胶，不如停止倒胶重新准备新得聚丙烯酰胺混合液,然后将新得胶倒入旧胶得上方。但就就是显然这种连接不就就是非常牢固。(我推举重新倒胶,制胶很关键,假如您后续还要做 blot,胶没有跑好浪费太多了！) ﻫ涂抹痕迹——例 2这块胶每孔上样量过大。大多数得泳道还就就是能分清条带,但就就是在 3、4 道涂抹痕迹非常明显。这些泳道得样品主要含有一种蛋白（血红蛋白得亚基 )，与 9、10 道一样。但就就是，3、4 道得样品低估了红细胞裂解物与红细胞胞浆组分中得蛋白含量。这些组分包含了过多得蛋白以至于样品需要稀释后才能进行蛋白含量测定。但就就是这名学生却忘记了这个样品已经稀释过了，因此造成了蛋白浓度得低估。（严重得失误啊!）小型胶每孔得蛋白样品得量为 2 ０－４ 0 微克,取决于所需得分辨率与混合液中包含得多肽数目。但就就是，假如就就是一个纯化样品上样 ,一个带包含了 2 ０－４ 0 微克蛋白,那么其结果肯定也就就是一团糟！ ﻫ涂抹痕迹——例 3ﻫﻫ这也就就是一个上样量过大得例子,这名学生似乎犯了与例 2 中同样得错误,因此在胶上也表现出各泳道得不一致性。 涂抹痕迹——例 4ﻫ涂抹痕迹可能常见于用非连续胶跑膜相关蛋白这类脂质含量丰富得样品。在非连续ＰＡ GE 中,样品蛋白基于两个因素而被超浓缩。首先,当样品从非限制性得积层胶移动至限制速度得分离胶时迁移速率陡然下降。其次 ,也就就是最重要得,P Ｈ变化造成蛋白样品电泳速率得改变,导致样品突然停滞。一个高约半厘米左右得样品被压缩成为一个仅为数微米厚得薄层条带,局部蛋白浓度急剧增加。胞膜相关蛋白一般于较低浓度就就是沉淀,因此泳道得顶部通常有一条神色得条带含有沉淀得蛋白。当电泳进行时沉淀得蛋白重新溶解然后持续进入凝胶,因此造成了一个持续性得较深得不可分辨得背景。许多膜相关蛋白得凝胶图像都显示同样得特征。ﻫ上图中４、７道得蛋白样品虽然含有相同得蛋白量,但就就是第4 道得样品中含有得膜蛋白得量超过了凝胶得分辨能力,造成了很深得涂抹痕迹。 症状２——条纹拖尾条纹拖尾——例 1ﻫﻫ这个不就就是非常严重,有条纹拖尾得泳道(图中左边...
