免疫磁捕获-实时荧光 PCR 快速检测鸡肉中沙门氏菌*张东方1，2 ，袁飞1 ，王娉1 ，胡玥1 ，陈颖1 ，葛毅强2，31( 中国检验检疫科学讨论院，北京，100123) 2( 中国农业大学食品学院，北京，100083)摘 要 对免疫磁捕获-实时荧光 PCR 检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步讨论。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化，通过实验最终确定了以 6 mg / mL EDC 和 5 mg / mL NHS 活化直径为 700 nm 的羧基聚苯乙烯磁性微 球，与浓度为 100 μg / mL 的沙门氏菌抗体在 37℃ 振荡孵育 1. 5 h，制备得到抗沙门氏菌免疫磁珠，与市售沙门氏 菌免疫磁珠试剂盒( Dynal 产品) 捕获效率相当。免疫磁捕获-实时荧光 PCR 检测方法检测限为 104 CFU / mL 左 右，能在 16 h 内检测出鸡肉中 104 CFU / mL 的沙门氏菌，可用于食品中沙门氏菌的快速检测。关键词 沙门氏菌，免疫磁捕获法，实时荧光 PCR，检测沙门氏菌属( Salmonella spp. ) 常存在于肉制品、蛋、奶类等畜禽产品中，是最常见的人畜共患的病原 菌之一，根据国际食源性病原菌所致危害的严重性， 沙门氏菌被列为首选控制的食源性致病菌［1］。目前 沙门氏菌的检验多采纳传统的检测方法、PCR 方法 及实时荧光 PCR 法等。传统的检测方法一般需要 5～ 7 d，周期长，过程繁琐; PCR 方法及实时荧光 PCR 方法，虽然操作简单，但需要待检样品中菌体达到较 高浓度。免疫磁珠( Immunomagnetic Beads，IMB ) 具 有选择性好，特异性强，能起到富集浓缩细菌的作用， 有效避开或减少漏 检，且 可 去 除食品样品中抑 制 PCR 扩增的成分。已有学者利用免疫磁珠结合传统 显色培育法、酶联免疫或普通 PCR 等方法进行沙门 氏菌检测，仍存在耗时长，操作复杂等问题［2 － 3］。本 讨论优化了沙门氏菌免疫磁珠制备条件，建立了沙门 氏菌免疫磁捕获-实时荧光 PCR 快速检测方法，利用 该方法检测了人工污染沙门氏菌鸡肉样品，并对比了 自制免疫磁珠与免疫磁珠试剂盒的捕获效率。猪霍 乱 沙 门 氏 菌 ( IQCC10502 ) 、病 牛 沙 门 氏 菌( IQCC10510) 、肯塔基沙门氏菌 ( IQCC10530 ) 、布伦 登卢 普 沙 门 氏 菌 ( IQCC10542 ) 、伤 寒 沙 门 氏 菌 ( IQCC10593) 、 肠 炎 沙 门 氏 菌 ( 氏 菌 IQCC10509 ) 、 山 夫 登 堡 沙 门 氏 菌(( IQCC10520) 、阿伯丁沙门氏菌...
