各生理指标实验步骤

1 丙二醛(M Ｄ A）含量得测定丙二醛在酸性与高温得条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA)反应生成红棕色得三甲川，在 532n ｍ处有最大光吸收。植物组织中可溶性糖与 TBA 得显色反应产物在 450n ｍ与 532n ｍ处也有吸收。测定时要排除可溶性糖得干扰,因此分别测定５ 3 ２ nm 与 45 ０ｎ m 处得吸光值，直接求得植物样品提取液中 MDA 得浓度；MDA 含量采纳硫代巴比妥酸法测定。计算公式如下:Ｃ(µmol、L—1）=6、4 ５ O Ｄ 53 ２-0、５ 6 ＯＤ 450进一步算出每克样品鲜重中丙二醛得含量（µmol ｇ—1ＦＷ）。试剂:10%三氯乙酸(TCA） ：10g 三氯乙酸定容于 1 ００ ml0、6％硫代巴比妥酸:０。６ g 用 1 ０％三氯乙酸 TCA 定容于１ 0 ０ m ｌ试验步骤：（1)取植物材料用液氮迅速研磨成粉，取０、2 ｇ左右材料，放入 5ml 离心管内.（2）加入５ｍ l 1 ０%得三氯乙酸，提取 30 ｍ in 后，1000 ０ r／min 离心 1５ｍ in。（3）取上清液２ ml，加入 2 ｍ l 0、6%TB Ａ，混匀,在 100℃水浴中煮１ 5ｍ in，冷却，冷却后再测量。(4)分别测定５３２ nm 与 450nm 处得吸光值。以 2ml(加 T Ｂ A，水）水代替提取液作为对比管。2 蛋白质含量测定－-——考马斯亮蓝 G—250 法实验原理：考马斯亮蓝 G-250 在游离状态下呈红色,当它与蛋白质结合后变为青色,前者最大光吸收在 465nm,后者在 5 ９５ｎ m。在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质一色素结合物在 59 ５ n ｍ波长下得光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质得定量测定。 仪器与试剂:牛血清白蛋白５ 00 微克/毫升:１ 0m ｇ蒸馏水定溶至 100 ｍｌ考马斯亮蓝 G－２ 50：10mg 溶于 5 ｍ l 9 ０％乙醇中,加入 10ml85%得磷酸,用蒸馏水定溶于１ 00ml操作步骤：１、标准曲线得制作: 取４支试管，按下表 配制不同浓度得牛血清白蛋白溶液各 1 毫升,加入５毫升考马斯亮蓝Ｇ—250 试剂，摇匀,放置 2 分钟后用 10 毫米光径得比色杯在 595ｎ m 下比色。做出标准曲线。管 号 １ 2 ３ 4 蛋白质含量（微克） ０ 5 ０ 100 １ 5 ０500 微克/毫升牛血 0 0、1 0、2 0、3清白蛋白量(毫升)蒸馏水量（毫升) １、0 ０、9 ０、8 0、７考马斯亮蓝-G250 5 5 ５ 5（毫升）２、样品中可溶性蛋白质得提取测定：称取植物叶片 0、2 克, 用 5ml 蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后,过滤,取滤液l、０ ...