动物细胞培育一、试验目得。1、掌握无菌操作技术。2、掌握原代与传代细胞培育.３、掌握细胞冷冻与复苏技术。4、了解培育成纤维细胞得形态.二、试验原理。将动物机体得组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用 EDT Ａ）或机械方法处理,分散成单细胞,置合适得培育基中培育,使细胞得以生存、生长与繁殖,这一过程称原代培育。细胞在培育瓶长成致密单层后,已基本上饱与,为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培育)。 传代培育也就是一种将细胞种保存下去得方法。同时也就是利用培育细胞进行各种实验得必经过程.悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。对具有移动特性得稳定细胞系或细胞株进行长期保存,一方面可以作为细胞讨论得试验材料,另一方面可以做细胞制品得生产材料。目前广泛应用得细胞保存方法就是低温冷冻保存法，。细胞得冷冻保存得原则就是慢冻快融，这样做就是为了防止细胞由于冷冻过程中产生了冰晶而发生细胞破裂．三、实验器材及药品.器材:怀孕得小白鼠、培育箱、培育瓶、培育皿、移液器、眼科剪、镊子、酒精灯、离心机、水浴锅、倒置显微镜、CO ２培育箱、超净工作台、离心管、高压灭菌锅、试管架等。药品:小牛血清、D Ｍ E Ｍ合成培育基、抗生素、DM Ｓ O 冷冻剂、胰酶、Ｐ BS缓冲液等。四、实验操作。1、消毒灭菌。将实验所需用到得工具(如枪头、培育皿、眼科剪、镊子以及每个人得实验服等)集中灭菌、烘干.配制７ 5％得酒精以备实验时所需。２、培育基得配制。分别取 10ml 得小牛血清、９ 0ml 得 DMEM 合成培育基,将两种培育基混合在一起，再向其中加入 1ml 得抗生素,吹打混匀就得到了细胞培育得培育液。3、原代培育。(１)、准备。将实验过程中会用到得工具以及药品全部放在超净工作台上进行紫外消毒灭菌。实验开始前带好乳胶手套,用酒精对手进行消毒.将怀孕得小白鼠放在酒精中杀死,取出子宫内得胚胎组织。（2）、剪切与消化。将胚胎组织放于平板中,用眼科剪将组织块剪碎,剪得越碎越好.将剪碎得组织块放于离心管中，加入大约 20 ０ µ ｌ得胰酶进行消化。也可将其置于 37 度恒温箱中进行消化。（3)、分离细胞.消化到一定时间时,假如离心管中得溶液中出现了明显得浑浊,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞，则应该加入与胰酶等量得培育液终止消化。离心管于离心机中离心,弃上清液,得到分散得细胞。(4)、转移细胞并...
