12 种中草药水煎剂抗刚地弓形虫感染的初步讨论刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种重要的人兽共患性寄生虫,对人类健康、公共卫生安全和畜牧业生产均危害严重。目前,尚无理想疫苗和治疗性药物。中草药在我国使用年份久远,种类丰富,所含成分极其复杂,可作为研发抗弓形虫感染特效药的重要突破口。因此,本文依照弓形虫疾病常见临床症状,有针对性地选择苍术等 12 种中草药作为实验对象,经分别制备水煎剂,旨在探究其抗刚地弓形虫感染效果,建立中草药抗弓形虫感染通用讨论方法的同时,也为日后研制弓形虫特效治疗药物和深化解析中草药单体抑制弓形虫胞内增殖分子机制奠定基础。首先,本文以我国传统中药炮制方法为基础,分别制备了 12 种中草药水煎剂,经检测吸光度和干重发现,所得水煎剂均含有不同程度的色素,并且干重与吸光度间无明显相关关系,相同干重的中草药水煎剂吸光度差别很大。其次,本文选择刚地弓形虫 ACT1 序列为靶基因,合成 5 对特异性较强的引物,经 PCR 扩增和琼脂糖凝胶电泳分析,优化了 PCR 反应条件,建立了适用性更强、应用范围更广的Real-time PCR 弓形虫定量分析系统,并且所得水煎剂对已建系统无干扰。细胞毒性检测结果显示,水煎剂种类不同,细胞毒性差异较大,当经 64 倍稀释后均毒性不明显,表明探究所得水煎剂抗弓形虫感染效果前需要(I)明确所选中草药有抑制刚地弓形虫体外增殖作用和(II)统一水煎剂作用浓度。鉴于本文所得水煎剂体外抗弓形虫感染效果评价主要是在 24 孔细胞培育板内完成的,因此我们以 9 种常见回归模型对 24 孔板内弓形虫速殖子数进行曲线拟合,经求解极值,获得单孔弓形虫感染量为 1542.21 个。预实验结果显示,槟榔、白薇、青蒿、蒲公英和柴胡等 5 种水煎剂经 64 倍稀释后体外抗弓形虫感染效果显著(P<0.05),表明所选中草药有抑制弓形虫速殖子增殖能力。将水煎剂最终作用浓度统一定为 64.0 mg/mL 后发现,槟榔、白薇、青蒿、佩兰和柴胡等 5 种水煎剂细胞毒性明显,其余 7 种水煎剂及其组合对体外弓形虫增殖较空白对比均极显著抑制(P<0.001),且蒲公英可单向增强苍术抗感染效果,苍术与金银花存在药物协同作用关系。探究水煎剂不同组合比对弓形虫感染影响时发现,苍术-蒲公英以 1:2 组合时体外抗感染效果较等比例组合降低(P<0.05),即过量蒲公英对苍术-蒲公英联合抗感染药效有减弱作用。此外,苍术-金银花以 2:1 组合时体外抗感染作用较等比例组合时明显降低(P<0.05),即过量苍术可显著减弱...
