HPLC 故障及排除方法诊状 可能的原因 解 决 方 法 (一)保留时间变化1
柱温变化柱恒温2
等度与梯度间未能充分平衡至少用 10 倍柱体积的流动相平衡柱3
缓冲液容量不够用>25mmol/L 的缓冲液4
柱污染每天冲洗柱5
柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6
柱快达到寿命采纳保护柱(二)保留时间缩短1
流速增加检查泵,重新设定流速2
样品超载降低样品量3
键合相流失流动相 PH 值保持在 3~7
5 检查柱的方向4
流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5
温度增加柱恒温(三)保留时间延长1
流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2
硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采纳碱至钝化柱3
键合相流失同前(二)34
流动相组成变化同前(二)45
温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分叉1
样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的 15%2
样品溶剂过强采纳较弱的样品溶剂3
柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采纳较弱腐蚀性条件4
柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5
进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1
进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2
样品中未知物处理样品3
柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4
三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配,用抗氧化剂5
水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC 级的水(六) 基线噪声1
气泡(尖锐峰)流动相脱气,加柱后背压2
污染(随机噪声)清洗柱,净化样品,用 HPLC 级试剂3
检测器灯连续噪声更换氘灯4
电干扰(偶然噪声)采纳稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5
检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1
柱超载降低样品量,增加柱直径采纳较高容量的固定相2
峰干扰清洁样品,调整流动相3
硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化
