不同染色体上的转基因果蝇的杂交重组和鉴定VIP专享

4． 不同染色体上的转基因果蝇的杂交重组和鉴定（开放实验）实验目的：把插入在不同染色体上的不同目的基因（分别处于两个品系果蝇中）通过重组交换整合 到 同 一 品 系 果 蝇 的 相 应 染 色 体 上 ， 并 得 到 可 以 稳 定 保 存 的 品 系 （ balanced 或homozygous）。 即利用 A/A;+/+和+/+;B/B 的果蝇重组为 A/A;B/B 的果蝇。背景知识：1. Gal4/UAS, Gal80 系统GAL4/UAS 系统是目前果蝇中十分常用的实验系统（见下图说明）。该系统利用组织特异性的启动子或增强子，将 GAL4 基因与启动子或增强子相连接,建立 GAL4 转基因系，通过这种启动子以细胞和组织特异性的方式来控制 GAL4 的表达。另外，将 UAS 与靶基因融合，建立带有 UAS-靶基因的转基因系。在杂交后代中,特异性表达的 GAL4 能以同样的方式调节UAS-靶基因的表达。图示. 果蝇中 GAL4/UAS，Gal80 系统Gal80ts 是一个用于辅助 Gal4-UAS 系统的新方法，最早的报道出现于 2025 年。Gal4-UAS 的表达虽然在空间上可以控制，但由于 Gal4 蛋白的持续表达，我们是无法在时间维度上控制目标 UAS 的表达的。因而通过这一系统表达的蛋白会从发育阶段开始，一直影响果蝇的生理过程。我们很难确定这一蛋白的起效时间实在发育阶段，还是成体阶段。Gal80ts 的出现可以克服这一缺点。在低温条件下（18℃），GAL80 会与 GAL4 蛋白结合，阻止 GAL4 和UAS 的结合，使得这一表达系统失效，即没有蛋白表达。而在我们希望表达蛋白的时候，可以对果蝇进行热激（30℃），使得 GAL80 蛋白不能与 GAL4 结合，GAL4 得以与 UAS 结合，表达特定蛋白。2. 转基因果蝇的重组在制作转基因果蝇的过程中，一般只能在同一染色体上操作。若我们希望获得具有两个插入基因的果蝇，且这两个基因位于不同的染色体上，就可以利用杂交实现这一过程。具体来讲，此次实验的 elav-Gal4 位于一号染色体（性染色体），Gal80ts 位于二号染色体。现有纯合的 elav-Gal4 果蝇，和 Gal80ts 果蝇。我们希望获得一种果蝇，其一号染色体上具有纯合的 elav-Gal4，同时二号染色体具有纯合的 Gal80ts。这样，在低温条件下，Gal80 会抑制 elav-Gal4 的作用，而高温条件下 Gal80ts 失效，elav-Gal4 得以表达。实验中需要利用平衡子来完成这一过程，平衡子具有相应的性状，且带平衡子的果蝇相应染色体不能发生重组，使得杂交过程和鉴定方法更为简单。为...