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不同染色体上的转基因果蝇的杂交重组和鉴定

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4. 不同染色体上的转基因果蝇的杂交重组和鉴定(开放实验)实验目的:把插入在不同染色体上的不同目的基因(分别处于两个品系果蝇中)通过重组交换整合 到 同 一 品 系 果 蝇 的 相 应 染 色 体 上 , 并 得 到 可 以 稳 定 保 存 的 品 系 ( balanced 或homozygous)。 即利用 A/A;+/+和+/+;B/B 的果蝇重组为 A/A;B/B 的果蝇。背景知识:1. Gal4/UAS, Gal80 系统GAL4/UAS 系统是目前果蝇中十分常用的实验系统(见下图说明)。该系统利用组织特异性的启动子或增强子,将 GAL4 基因与启动子或增强子相连接,建立 GAL4 转基因系,通过这种启动子以细胞和组织特异性的方式来控制 GAL4 的表达。另外,将 UAS 与靶基因融合,建立带有 UAS-靶基因的转基因系。在杂交后代中,特异性表达的 GAL4 能以同样的方式调节UAS-靶基因的表达。图示. 果蝇中 GAL4/UAS,Gal80 系统Gal80ts 是一个用于辅助 Gal4-UAS 系统的新方法,最早的报道出现于 2025 年。Gal4-UAS 的表达虽然在空间上可以控制,但由于 Gal4 蛋白的持续表达,我们是无法在时间维度上控制目标 UAS 的表达的。因而通过这一系统表达的蛋白会从发育阶段开始,一直影响果蝇的生理过程。我们很难确定这一蛋白的起效时间实在发育阶段,还是成体阶段。Gal80ts 的出现可以克服这一缺点。在低温条件下(18℃),GAL80 会与 GAL4 蛋白结合,阻止 GAL4 和UAS 的结合,使得这一表达系统失效,即没有蛋白表达。而在我们希望表达蛋白的时候,可以对果蝇进行热激(30℃),使得 GAL80 蛋白不能与 GAL4 结合,GAL4 得以与 UAS 结合,表达特定蛋白。2. 转基因果蝇的重组在制作转基因果蝇的过程中,一般只能在同一染色体上操作。若我们希望获得具有两个插入基因的果蝇,且这两个基因位于不同的染色体上,就可以利用杂交实现这一过程。具体来讲,此次实验的 elav-Gal4 位于一号染色体(性染色体),Gal80ts 位于二号染色体。现有纯合的 elav-Gal4 果蝇,和 Gal80ts 果蝇。我们希望获得一种果蝇,其一号染色体上具有纯合的 elav-Gal4,同时二号染色体具有纯合的 Gal80ts。这样,在低温条件下,Gal80 会抑制 elav-Gal4 的作用,而高温条件下 Gal80ts 失效,elav-Gal4 得以表达。实验中需要利用平衡子来完成这一过程,平衡子具有相应的性状,且带平衡子的果蝇相应染色体不能发生重组,使得杂交过程和鉴定方法更为简单。为...

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