修改--培养基配制注意事项

邹梦廉撰写，赵培修改。1.物品存放位置：3 个 1000 mL 三角瓶、6 个封口膜（每瓶两个，目前套在瓶子上的比较洁净，最好不要另找）、皮筋在水池一侧第二个条台靠过道的实验桌下柜子里。三角瓶用前要用大试管刷和自来水刷洗洁净，再用蒸馏水润洗（蒸馏水在白色的方桶里）。试剂在墙边远离水池数来第二个柜子里，是个试剂柜，第二层有氯化钠，第三层有蛋白胨（英文是 peptone，千万别与胰蛋白胨 tryptone 搞混了），琼脂 agar 在第四层。1 M 氯化钙、1 M 硫酸镁、1M 磷酸钾缓冲液在超净台里。另外胆固醇和三角瓶放在一个位置，胆固醇不要照紫外。2.灭菌前配制：每瓶配 600 mL：氯化钠 1.8g，琼脂 15g，蛋白胨 1.5g，称量时注意天平水平，用经蒸馏水润洗的量筒加 590 mL 左右的蒸馏水，不用搅拌。3.高压灭菌：高压灭菌锅在水池靠门边，要把篮子提出来，加蒸馏水至微微没过底部（底部外围是有沟的），少加会干锅，多加后假如是盒子，可能会积水很多。放回篮子，把三角瓶垒上。试剂瓶的盖子盖好后稍松一圈。开电源后调温度 121 ℃，时间 30 min（默认为 20 min，用温度/时间切换钮按到“TIME”指示灯亮，用上箭头跳到 30 min），“开始”。排气是自动的。因为有恒温期前升压、恒温期后降压的过程，实际用时可能为 1.5 h 以上。待压力表示数为 0 时盖子才打的开。要及时把边台上的水浴锅打开恒温在 50-60 ℃。待灭菌锅内温度降到 80 ℃可以取出三角瓶，放到水浴锅里降温到 60 ℃左右（不那么烫手）后保温（水浴锅放不下三角瓶，可以轻微地转动瓶子使均匀接触水）。4.平板的准备，从箱子里（超净台旁）取出平板（10 个一小袋）剪开，放在超净台里照紫外至少 15 分钟。5.倒平板：在超净工作台中操作（使用前开紫外灯 15 分钟，使用中要开通风），打开酒精灯，戴手套，用 75%酒精消毒手套（喷壶里）。用灭菌枪头（超净台中）向每个三角瓶中分别加入 600 μL 1 M 氯化钙、600μL 1 M 硫酸镁、15 mL 1M 磷酸钾缓冲液（用一个长的、最大刻度为 15 mL 的管子来量）、600μL 胆固醇（最后加，特别要摇匀，否则容易结块），加时封口膜不要离瓶口太远，要摇匀（但不要太剧烈，因为较低温时琼脂越摇越容易凝聚，而且会起泡，影响之后的观察）。倒平板时始终留四五个在下面垫着提供操作高度，一手一个个从下往上拿起盖子（及其上的一摞），一手倒培育基，一定要尽量平（手的位置基本固定），要防止倒...