邹梦廉撰写,赵培修改。1.物品存放位置:3 个 1000 mL 三角瓶、6 个封口膜(每瓶两个,目前套在瓶子上的比较洁净,最好不要另找)、皮筋在水池一侧第二个条台靠过道的实验桌下柜子里。三角瓶用前要用大试管刷和自来水刷洗洁净,再用蒸馏水润洗(蒸馏水在白色的方桶里)。试剂在墙边远离水池数来第二个柜子里,是个试剂柜,第二层有氯化钠,第三层有蛋白胨(英文是 peptone,千万别与胰蛋白胨 tryptone 搞混了),琼脂 agar 在第四层。1 M 氯化钙、1 M 硫酸镁、1M 磷酸钾缓冲液在超净台里。另外胆固醇和三角瓶放在一个位置,胆固醇不要照紫外。2.灭菌前配制:每瓶配 600 mL:氯化钠 1.8g,琼脂 15g,蛋白胨 1.5g,称量时注意天平水平,用经蒸馏水润洗的量筒加 590 mL 左右的蒸馏水,不用搅拌。3.高压灭菌:高压灭菌锅在水池靠门边,要把篮子提出来,加蒸馏水至微微没过底部(底部外围是有沟的),少加会干锅,多加后假如是盒子,可能会积水很多。放回篮子,把三角瓶垒上。试剂瓶的盖子盖好后稍松一圈。开电源后调温度 121 ℃,时间 30 min(默认为 20 min,用温度/时间切换钮按到“TIME”指示灯亮,用上箭头跳到 30 min),“开始”。排气是自动的。因为有恒温期前升压、恒温期后降压的过程,实际用时可能为 1.5 h 以上。待压力表示数为 0 时盖子才打的开。要及时把边台上的水浴锅打开恒温在 50-60 ℃。待灭菌锅内温度降到 80 ℃可以取出三角瓶,放到水浴锅里降温到 60 ℃左右(不那么烫手)后保温(水浴锅放不下三角瓶,可以轻微地转动瓶子使均匀接触水)。4.平板的准备,从箱子里(超净台旁)取出平板(10 个一小袋)剪开,放在超净台里照紫外至少 15 分钟。5.倒平板:在超净工作台中操作(使用前开紫外灯 15 分钟,使用中要开通风),打开酒精灯,戴手套,用 75%酒精消毒手套(喷壶里)。用灭菌枪头(超净台中)向每个三角瓶中分别加入 600 μL 1 M 氯化钙、600μL 1 M 硫酸镁、15 mL 1M 磷酸钾缓冲液(用一个长的、最大刻度为 15 mL 的管子来量)、600μL 胆固醇(最后加,特别要摇匀,否则容易结块),加时封口膜不要离瓶口太远,要摇匀(但不要太剧烈,因为较低温时琼脂越摇越容易凝聚,而且会起泡,影响之后的观察)。倒平板时始终留四五个在下面垫着提供操作高度,一手一个个从下往上拿起盖子(及其上的一摞),一手倒培育基,一定要尽量平(手的位置基本固定),要防止倒...