基因工程期末复习第一章：基因工程1. 定义：通过基因操作来定向改变或修饰生物体或人类自身，并具有明确应用目的的活动称为基因工程。2. 基因工程讨论的主要内容或步骤：基因克隆的通用策略 ：涉及的过程可用分/合成、切、连、转、选、鉴。① 从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或 PCR 扩增等步骤，分离出带有目的基因的 DNA 片段；② 在体外，将带有目的基因的外源 DNA 片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上，形成重组 DNA 分子；③ 将重组 DNA 分子转移到适当的受体细胞（寄主细胞），并与之一起增殖；④ 从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了细胞重组 DNA 分子的受体细胞克隆； ⑤ 从筛选出来的受体细胞克隆，提取出已经得到扩增的目的基因，供进一步分析讨论使用 ； ⑥ 将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。 3.三大元件：载体、质粒、片段。第二章：分子克隆工具酶1、工具酶：限制性核酸内切酶、DNA 连接酶、DNA 聚合酶、DNA 修饰酶、核酸外切酶、单链核酸内切酶。2、限制性内切酶：是一类能够识别双链 DNA 分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA 双链结构的核苷酸内切酶。三种（Ⅰ型酶、Ⅱ型酶、 Ⅲ型酶）3、甲基化酶：原核生物甲基化酶是作为限制与修饰系统中的一员，用于保护宿主 DNA 不被相应的限制酶所切割。三种（）4、回文结构：双链 DNA 中含有的二个结构相同、方向相反的序列称为反向重复序列，每条单链以任一方向阅读时都是一样的。5、同裂酶（isoschizomers)：指来源不同但识别相同靶序列的核酸内切酶。同裂酶可能进行同样的切割，产生同样的末端。但有些同裂酶对甲基化位点的敏感性不同。6、同尾酶（isocaudamer）：指来源不同、识别靶序列不同但产生相同的粘性末端的核酸内切酶。利用同尾酶可使切割位点的选择余地更大。7、影响核酸内切酶活性的因素：① DNA 浓度② DNA 的甲基化程度③酶切消化反应的温度（大多数酶的标准反应温度 37 度）④ DNA 的分子结构。星星活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特别性称为星星活性（star activity)。8、Ｔ 4 连接酶：该酶常从Ｔ 4 噬菌体的受感细胞中提取，是由Ｔ 4 噬菌体基因组所编码的，所以基因工程中常用的连接酶是Ｔ 4 连接酶。9、影响连接酶作用的因素① 反应温度：连接缺口的温度：37...
