(6)改良的 SLS(Sodium Lauroyl Sarcosine 十二烷基肌氨酸钠)方法提取玉米 DNA操作流程:1)取 3-5 g 新奇的玉米叶片于 1
5 mL 离心管中,液氮速冻后用研磨棒研磨
2)加 700 µL SLS 提取液,涡旋振荡 3-5 min,混匀
3)加 700 µL 酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻轻颠倒混匀
4)4℃,12,000 rpm,离心 10 min
5)将上清转入新的离心管中,加入等体积异丙醇轻轻摇晃 1-2 min,-20℃,静置 10-20 min
6)4℃,12,000 rpm,离心 6~8 min,弃上清,用 75%乙醇洗涤
7)重复 6)
8)4℃,12,000 rpm,4 min,倒上清,将离心管倒扣于吸水纸上,晾干 DNA
9)加 TE 或超纯水溶解 DNA
10) 对上述 DNA 进行测量,稀释到 20-200 ng/µL 后-20℃储存备用
附:1000mL SLS 提取液配制方法:10% SLS 100mL(10 g 固体)0
2 mol/LEDTA 100 mL(7
4 g,pH=8
0)1 mol/L NaCl 100 mL(5
85 g)1 mol/L Tris-HCl 100 mL(12
1 g,pH=8
0)定容至 1000 mL