一、做 ELISA 确定抗原最佳包被浓度，做方阵滴定具体怎么做呢?选择好一份已知为阳性和阴性背景的标本，将你的抗原用 1*CB PH=9.6 或 1＊PB PH=7。4 进行倍比稀释(8 个条件）后加入 96 孔板每孔 100ul。（一般包被浓度 100ng 抗原或抗体/孔，最优包被条件需进行试验选择）4 度过夜取出后甩干，加入 20％NBS 封闭每孔 200ul。37 度 2h 热封，甩去后拍干即可。将你 HRP或 AP 标记的抗原或二抗用酶标稀释液进行稀释（倍比稀释 4 个梯度)即可.棋盘滴定就是板酶交叉，同时带上阳性、阴性通过试验确定最佳 P/N 的包被搭配 E的试验2．抗原和抗体最佳工作浓度的确定 抗原抗体反应要求在最适比例条件下进行，ELISA 反应试剂多，其工作浓度不同对结果影响较大，因此必须对包被抗原(抗体）和酶标抗体(抗原）进行最佳工作浓度的滴定和选择，以达到最佳的测定条件。 1）方阵(棋盘）滴定法选择包被抗原的工作浓度 用包被液将抗原作一系列稀释（1:50～l：800)后，按行进行包被、洗涤.按列分别加入用稀释液 1：100 稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液（作空白对比），保温，洗涤。加工作浓度酶标抗体，洗涤,加底物显色，加酸终止反应后读取 A 值。选择强阳性参考血清 A 值；为 0．8 左右，阴性参考血清 A 值〈0．1 的包被抗原稀释度为工作浓度。 方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度 将抗体用包被液稀释为 10mg／L、lmg／L、0。1mg／L 三个浓度按行包被，每一个浓度包被三行（每行 3 孔)，分别在每个浓度包被的第一、二、三行中分别加入强阳性抗原，弱阳性抗原和阴性对比，将酶标抗抗体用稀释液稀释为 1:l 000、l：5000、l：10000 三个浓度，分别加入每个浓度包被的第一、二、三列中.加底物显色，加酸终止反应，分别读取 A 值。以强阳性抗原液 A 值在0。8 左右，阴性参考 A 值<0。1 的条件为最适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的最佳工作浓度。 二、ELISA 最适工作浓度的选择及标准化操作三、ELISA 法抗原包被的浓度如何确定？ELISA 法进行抗原包被的时候，抗原包被的浓度是如何确定的。看到有些资料中方阵滴定法，稀释抗原和血清，以强阳性抗原液 A 值在 0。8 左右，阴性参考 A 值〈0.1 的条件为最适条件。为什么选择这个为最适条件？弱阳性血清有什么用处？ 在摸索包被浓度的时候，血清中抗体的含量是固定的吗？需要提前定值吗?急需答案一般我们做的时候抗原抗体...
