elisa的检测原理及步骤

Elisa Kit 使用方法检测原理:本实验采纳双抗体夹心 ELISA 法。抗人 IL—4 单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的 IL-4 会 与单抗结合,游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人 IL-4 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合；抗人 IL—4 抗体与结合在单抗上的人 IL—4 结合而形成免疫 复合物，游离的成分被洗去.加入显色底物，若反应孔中有 IL-4,辣根过氧化物酶会使无色 的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在 450nm 处测 OD 值，IL—4 浓度与 OD450 值之间呈正比，可 通过绘制标准曲线求出标本中 IL—4 的浓度。试剂盒组成:1．抗体预包被酶标板（8×12 或 8×6）2．冻干标准品（2 / 1 支；0.5ng/支）3．标准品和标本稀释液（橙盖瓶）（1 瓶;20ml/12ml）4．浓缩生物素化抗体（紫盖瓶）(1 支）5．生物素化抗体稀释液（蓝盖瓶）（1 瓶；16ml/10ml)6．浓缩酶结合物（棕盖瓶）（1 支）7．酶结合物稀释液（紫盖瓶)（1 瓶;16ml/10ml）8．浓缩洗涤液 20× （白盖瓶）(1 瓶；50ml/25ml)9．显色底物（TMB）（棕盖瓶）（1 瓶；12ml/6ml）10．反应终止液(红盖瓶）（1 瓶;12ml/6ml）11．封板胶纸（6/3 张）12．产品说明书（1 份)标本收集:1。 收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管.2. 血浆抗凝剂推举使用 EDTA。避开使用溶血,高血脂标本。3。 标本应清亮透明,悬浮物应离心去除。4. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于—20℃，-70℃电冰箱内，避开反复冻融,3-6 月内检测。5. 假如您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况,做适当倍数稀释(建 议做预实验，以确定稀释倍数)。注意事项:1。 试剂盒使用前请保存在 2—8℃。复溶后的标准品应分装后,将其放在-20～-70℃贮存。2. 浓缩生物素化抗体,浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁 或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或 1000 转/分离心 1 分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底.取用前，请用移液器小心吹打 4—5 次使溶液混匀.3。 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象,微加热至 40℃使结晶完全溶解后 再配制洗涤液。（加热温度不要超过 50℃）使用时洗涤液应为室温。4。 若需要分次使用标准品应根据每一次用量分装，将其放在-20～—70℃贮存。避开反复冻 融。5。 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）.6。 充分轻微...