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elisa的检测原理及步骤

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Elisa Kit 使用方法检测原理:本实验采纳双抗体夹心 ELISA 法。抗人 IL—4 单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的 IL-4 会 与单抗结合,游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人 IL-4 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合;抗人 IL—4 抗体与结合在单抗上的人 IL—4 结合而形成免疫 复合物,游离的成分被洗去.加入显色底物,若反应孔中有 IL-4,辣根过氧化物酶会使无色 的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在 450nm 处测 OD 值,IL—4 浓度与 OD450 值之间呈正比,可 通过绘制标准曲线求出标本中 IL—4 的浓度。试剂盒组成:1.抗体预包被酶标板(8×12 或 8×6)2.冻干标准品(2 / 1 支;0.5ng/支)3.标准品和标本稀释液(橙盖瓶)(1 瓶;20ml/12ml)4.浓缩生物素化抗体(紫盖瓶)(1 支)5.生物素化抗体稀释液(蓝盖瓶)(1 瓶;16ml/10ml)6.浓缩酶结合物(棕盖瓶)(1 支)7.酶结合物稀释液(紫盖瓶)(1 瓶;16ml/10ml)8.浓缩洗涤液 20× (白盖瓶)(1 瓶;50ml/25ml)9.显色底物(TMB)(棕盖瓶)(1 瓶;12ml/6ml)10.反应终止液(红盖瓶)(1 瓶;12ml/6ml)11.封板胶纸(6/3 张)12.产品说明书(1 份)标本收集:1。 收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管.2. 血浆抗凝剂推举使用 EDTA。避开使用溶血,高血脂标本。3。 标本应清亮透明,悬浮物应离心去除。4. 标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于—20℃,-70℃电冰箱内,避开反复冻融,3-6 月内检测。5. 假如您的样本中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建 议做预实验,以确定稀释倍数)。注意事项:1。 试剂盒使用前请保存在 2—8℃。复溶后的标准品应分装后,将其放在-20~-70℃贮存。2. 浓缩生物素化抗体,浓缩酶结合物体积小,运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁 或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或 1000 转/分离心 1 分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底.取用前,请用移液器小心吹打 4—5 次使溶液混匀.3。 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,微加热至 40℃使结晶完全溶解后 再配制洗涤液。(加热温度不要超过 50℃)使用时洗涤液应为室温。4。 若需要分次使用标准品应根据每一次用量分装,将其放在-20~—70℃贮存。避开反复冻 融。5。 不同批号的试剂盒组份不能混用(洗涤液和反应终止液除外).6。 充分轻微...

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