这里为您介绍二代测序的相关流程和应用
随着人类基因组工程的完成,对于低花费的测序技术的需求促进了高通量二代测序技术的进展
这些新的测序平台允许进行高通量测序,具有广泛的应用:全基因组从头测序或者重测序目标序列重测序转录组分析微生物组讨论基因调控讨论NGS 序列二代测序仪器有很多种组合,在通量、片段长度、准确度、每一轮测序成本、每百万碱基对测序成本、初始成本、规格和技术方面存在存在差异
从规格和初始成本的角度而言,二代测序仪器可轻松地分类为更窄的范围,也就是所谓的“台式测序仪”和高通量仪器
台式测序仪使得任何实验室都可以像使用 real—time PCR 一样,自己进行测序
这些仪器可以和一些靶标序列富集技术相结合,用在一些临床的应用中,其中:选定的靶标基因用于深度分析,以检测稀有的突变,或者检测多样样本中(比如癌症样本)中的突变
目前,这些仪器的通量在 10 Mb 到 7
5 Gb 之间,但是随着硬件,软件和试剂的持续改善,通量也在稳步增加
高通量测序仪非常适合于大量的,基因组范围的讨论,每次测序能测定 600 Gb 的序列
一些这样的高通量和高精度的平台,能测定的片段长度相对较短,这对于高重复性的序列和未知基因组的从头测序就可能成为问题
与此相反,也有一些仪器能测序的片段较长(达到2500 bp),但是其精度和测序能力(90 Mb)要低很多
还有一些测序能力位于两者之间的仪器(~800 bp,700 Mb)
因此,应用决定了哪一种仪器是最合适的
有一种新的方法被称作“纳米孔测序”
这种技术中,根据一个 DNA 链通过一个合成的或者蛋白纳米孔道所引起的电流的改变,可以确定通过这个孔道的碱基
这理论上可以仅用一步就测序一个完整的染色体,而不需要生成新的 DNA 链
DNA 测序二代 DNA 测序的工作流程如下:DNA 样本制备文库构建和验证文库分子大规模平行