1．2.2 目的基因的导入、检测与鉴定[学习目标] 1.理解目的基因导入受体细胞的方法。2.掌握检测与鉴定目的基因的方法。方式一 通过前面的学习，我们了解了基因工程中目的基因的获取和基因表达载体的构建。在目的基因与载体连接成重组 DNA 分子以后，下面的重要工作主要是将其导入受体细胞进行扩增和筛选，获得大量的重组 DNA 分子，这就是外源基因的无性繁殖，即克隆(cloning)。方式二 目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。在完成将目的基因导入受体细胞这一步骤后，在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组 DNA 分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源 DNA 组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。重组 DNA 分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。一、将目的基因导入受体细胞1．转化的含义目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2．转化的方法(1)导入植物细胞① 农杆菌转化法：将目的基因导入双子叶植物和裸子植物时最常用方法。a．土壤农杆菌的特点：植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌侵染，其 Ti 质粒上的 T-DNA(可转移的 DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体的 DNA 上。b．方法步骤：目的基因插入 Ti 质粒的 T-DNA 上→转入农杆菌→导入植物细胞→目的基因插入植物细胞中的染色体 DNA 上→目的基因表达。② 基因枪法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。目的基因包裹在微小的金粉粒子或钨粉粒子表面→用基因枪高速射入受体细胞或组织中→目的基因表达。③ 花粉管通道法在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，滴加目的基因，使目的基因借助花1粉管通道进入受体细胞。(2)导入动物细胞① 方法：显微注射技术。② 常用受体细胞：受精卵。③ 步骤：目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的转基因动物(3)导入微生物细胞① 原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。② 常用的方法：a．用 Ca 2 ＋ 处理细胞，...
